[发明专利]一种重金属抗性果胶杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物化工领域，具体涉及一种重金属抗性果胶杆菌及其应用。 

背景技术

随着人类社会工业经济的发展和农业生化用品的增加，重金属污染的问题日渐尖锐，已经成为全球关注的重大环境问题之一。重金属污染会造成农田土壤肥力退化，农产品品质降低，而且加快环境水质恶化，并通过食物链，最终影响到人类健康。镉是一种毒性很大的重金属，其化合物也大都属于毒性物质。镉用途很广，颜料、合金、电镀、电池、冶金等都要用到镉。随着现代工农业生产的发展,“三废”的排放、污水灌溉及农药、除草剂和化肥的使用越来越多,土壤中镉的含量显著增加,土壤-植物-环境系统中的Cd污染问题日趋严峻,从而使农产品的安全性受到严重威胁。正是由于这样一些原因，国际和国内对于重金属污染及其防治的研究已经成为环境、化学、生命科学等相交叉的重点和热点研究领域，相关应用性研究侧重于分析重金属污染的来源、防治措施和环境修复等方面。 

目前国内外治理重金属污染，主要采用离子交换、化学沉淀、溶剂提取等传统的物理化学方法。由于需要复杂的设施设备以及破坏土层结构，物理化学修复法的投资成本较高，并且它们还会影响土壤本生的母质性质甚至会破坏土壤生物的多样性，所以对于大面积受污染的土壤不宜使用。然而，生物修复技术因其独有的优势逐渐被推到人面的关注范围之内。生物修复是指一切以生物为主体来治理环境污染的技术。它包括利用动物、植物和微生物吸收、转化、降解土壤和水体中的污染物，使环境中污染物的浓度降低，或将污染物转化为其他无污染物质，以及使污染物稳定化，避免其向环境中扩散。在环境保护研究方面，微生物修复也成为很多研究者的兴趣所在。针对微生物对重金属抗性和富集的研究是利用微生物修复重金属污染的一个很好的途径。因为这方面的研究既可以为微生物修复重金属污染提供技术支持，也能促进人们弄清楚微生物对重金属抗性的机理，从而更好地进行环境修复和生态保护。利用果胶杆菌开展重金属吸附的应用开发未见他人报道，本专利提供一株重金属抗性果胶杆菌及其在重金属吸附中的应用。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种重金属抗性果胶杆菌及其应用。将菌种活化后可用于重金属吸附剂，对重金属镉最大吸附量达到113mg/L。该菌可用于制作重金属吸附剂，在重金属修复和回收方面有应用价值。 

本发明的技术方案是：一种重金属抗性果胶杆菌，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC NO.7794；保藏日期2013年6月21日，分类命名为：坚固杆菌，Pectobacterium sp.，菌株16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所述，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 

上述重金属抗性果胶杆菌的制备方法为： 

（1）从土壤中分离样品，样品加入100mLLB液体培养基中，在250mL锥形瓶中，以120r/min转速于28℃培养48h涂布于LB固体平板上，获得菌株;所述LB液体培养基组分为：每1L蒸馏水中含有蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl10g；所述LB固体平板组分为：每1L蒸馏水中含有蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl10g琼脂粉12g； 

（2）将菌落接种于含镉筛选培养基，在培养箱中培养2d，筛选抗镉细菌，所用的培养基为：每1L培养基中含有50mg/L，蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl10g，琼脂粉12g，以蒸馏水补足体积至1L； 

（3）不断提高培养基中镉浓度直至Cd²⁺浓度为2000mg/L，获得耐镉菌株。 

（4）对细菌16S rDNA基因克隆和序列分析；用于克隆细菌16S rDNA基因的上游引物序列为：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG,下游引物序列为：GGTTACCTTGTTACGACTT。 

本发明的有益效果是:用含有Cd²⁺浓度为2000mg/L的筛选培养基，从土壤中筛选并鉴定本发明的重金属抗性果胶杆菌NP22。将菌种活化后可用于重金属吸附剂，对重金属镉最大吸附量达到113mg/g。该菌可用于制作重金属吸附剂，在重金属修复和回收方面有应用价值。 

附图说明

图1是果胶杆菌NP22的菌落图片。 

图2是细菌16S rDNA的琼脂糖凝胶电泳图。（左边是Marker：D2000，从上到下一次大小为2000bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100bp；右边是16SrDNA）。 

具体实施方式

1、材料