[发明专利]黑果枸杞多糖的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于黑果枸杞深加工领域，与植物多糖的提取方法有关，尤其与以提取色素后的黑果枸杞残渣为原料制备抗氧化活性的黑果枸杞多糖的方法有关。

技术背景：

黑果枸杞是茄科（Solanaceae)枸杞属（Lycium）植物黑果枸杞的成熟果实。黑果枸杞蒙名为“乔诺英—哈尔马格”、藏药名“旁玛”。黑果枸杞味甘、性平，富含蛋白质、枸杞多糖、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等多种营养成分。其中所含的枸杞多糖具有调节免疫力、清除自由基、抑制肿瘤生长、延缓衰老、降血脂、降血糖和抗疲劳的作用，具有较大的开发利用价值和市场前景。

枸杞多糖是植物多糖的一种，植物多糖是由许多相同或不同的单糖以α一或β一糖苷键所组成的化合物，普遍存在于自然界植物体中，包括淀粉、纤维素、多聚糖、果胶等。由于植物多糖的来源广泛，不同种的植物多糖的分子构成及分子量各不相同，其相应的生物活性和作用也不尽相同。枸杞多糖主要来源于枸杞属植物枸杞、黑果枸杞等果实。 

目前植物多糖的常规提取方法包括水提醇沉法、微波提取法、酸碱分解提取法等，此外还包括超声波辅助提取、超滤法、超临界提取方法等新技术和新方法。常规方法大多需要经过高温处理，不利于保护多糖活性，而近年发展起来的新技术对设备要求较高，这无疑增加了多糖提取制备的成本。 

中国专利CN101029088公开了一种枸杞多糖的制备方法，该专利采用枸杞鲜果为原料，利用柱层析分离纯化枸杞多糖。整个工艺包括浸泡、破碎、提取、酶解、柱层析、醇沉、脱醇、干燥等工序，利用果胶酶处理提取液，提高了多糖纯度，但是所选酶较为单一，破碎为常规破碎，未能提高多糖收率和抗氧化活性,原料未充分利用。 

发明内容：

本发明的目的是提供一种工艺简单、操作方便、成本低、多糖提取率高、多糖抗氧化活性强，黑果枸杞利用充分的黑果枸杞多糖的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的： 

黑果枸杞多糖的制备方法，采用提取完色素的黑果枸杞废渣为原料，其制备步骤如下：

（1）将提取完色素的黑果枸杞残渣在55℃以下干燥，用低温超微粉碎机进行粉碎，粉碎后的颗粒有95%以上颗粒通过300目药筛；

（2）取过筛后的黑果枸杞干燥粉末置于提取器皿中，加入10—15倍量石油醚萃取1—3次，每次1—2小时，过滤取滤渣，干燥，使石油醚挥发干净，得到脱脂粉末；

（3）将纤维素酶、果胶酶溶于pH为4—6缓冲溶液中,配制成质量百分浓度为1.2%—3.0%的纤维素酶、果胶酶混合溶液，所述缓冲液为柠檬酸、柠檬酸钠混合缓冲液；

（4）将步骤（2）中的脱脂粉末置于提取器中，加入8—15倍量纤维素酶、果胶酶混合溶液，在45—65℃条件下恒温浸提（温度过高酶会失去活性）10—50min，得混合物；

(5)将步骤（4）中的混合物置于低温冰箱，—80℃快速冷冻4—8min后取出在室温下解冻，如此结冻—解冻反复循环3—7次；

（6）过滤步骤（5）中经过反复冻融处理的混合物，取滤液；

（7）蒸发步骤（6）中的滤液，温度控制在55—65℃，浓缩至滤液体积8—12％得浓缩液，向浓缩液中缓缓加入3—7倍量无水乙醇，并不断搅拌，然后在3—6℃，静置8—16小时，得醇沉液；

   （8）离心步骤（7）中的醇沉液，收集沉淀，并以无水乙醇洗涤2—5次，然后冻干即得黑果枸杞多糖粗品，；

   （9）采用聚酰胺色谱柱法或Sevag法脱去黑果枸杞粗多糖中的蛋白质，然后浓缩到质量百分数7—9%，真空冷冻干燥，得到黑果枸杞多糖。

超微粉碎能把原材料加工成微米甚至纳米级的微粉。超微粉碎技术能够极大的的破坏细胞结构，甚至打破细胞壁，使存在于细胞内的多糖成分暴露出来，能够提高多糖提取率。同时，超微粉碎也可以改变提取物中多糖分子的分子量、糖苷键比例等，进而改变多糖提取物的水溶性、生物学特性等。 

植物多糖大多存在于植物细胞壁中，细胞壁主要由纤维素、半纤维素、果胶等物质构成，选用纤维素酶、果胶酶对中药材进行预处理，能够分解细胞壁成分，破坏细胞壁结构，产生局部坍塌、溶解、疏松，减少了提取时来自细胞壁、细胞间质的阻力，能加快有效成分溶出细胞的速率，提高提取效率。 

低温冻融过程中会由于细胞内外温度变化不均产生巨大温差，这种温差带来的热冲击效应能有效破坏细胞结构，进而使细胞内的多糖成分充分溶出，能有效提高多糖浸出率，且低温冻融提取过程始终在较低温度下进行，有效减少了多糖活性成分的损失。