[发明专利]一种磷脂酶A1的固定化方法

权利要求书

1.一种磷脂酶的固定化方法，所述方法包括步骤： 

a）将选自大孔型吸附树脂或离子交换树脂的载体与磷脂酶A1接触，使所述磷脂酶A1固定于所述载体； 

b)干燥步骤a)中所得的固定有磷脂酶A1的载体，以获得所述固定化磷脂酶A1。 

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载体与磷脂酶接触前，还包括前处理的步骤，优选的， 

所述大孔吸附树脂的前处理方法为：将所述大孔吸附树脂置于水中浸泡去杂，然后用有机溶剂浸泡1～24小时，优选2～12小时，以去除有机杂质和不溶物，再用水洗去所述溶剂，优选的，所述有机溶剂为：乙醇、正己烷、丙酮或石油醚； 

所述离子交换树脂的前处理方法为：i）使用酸液处理树脂，或酸液和碱液交替处理树脂，ii）使用碱液处理树脂后，将所述树脂水洗至水呈中性，优选的， 

所述碱液浓度为0.05mol/L～1mol/L；和/或 

所述酸液浓度为0.05mol/L～1mol/L；和/或 

所述处理为浸泡或冲洗所述树脂；和/或 

所述酸液和碱液交替处理树脂的次数为1-5次。 

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔型吸附树脂为极性大孔型吸附树脂或非极性大孔型吸附树脂，所述离子交换树脂为阳离子交换树脂，优选为强碱性或弱碱性的阳离子交换树脂，或阴离子交换树脂，优选为强碱性或弱碱性的阴离子交换树脂； 

优选的树脂的孔径为50～150nm，比表面积为200-2000㎡/g；更优选的， 

所述极性大孔型吸附树脂选自：DA201、LSA-10、Amberlite XAD7HP、LX1010C或其组合； 

所述非极性大型孔吸附树脂选自：D101、HPD100A、AmberliteXAD-4或其组合； 

所述阳离子交换树脂选自：D113、D001、Ambetlite IRC50或其组合； 

所述阴离子交换树脂选自：D311、D382、NKX-8、D213、D201、LX1000HA或其组合。 

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷脂酶选自：嗜热丝孢菌 （Thermomyces lanuginosus），尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum），南极假丝酵母（Candida antarctica），褶皱假丝酵母（Candida rugosa），米黑根毛霉（Rhizomucor miehei），爪哇毛霉（Mucor javanicus），雪白根霉（Rhizopusnivenus），米黑毛霉（Mucor miehei），假单孢菌（Pssudomonas sp.），米根霉（Rhizopus oryzae），黑曲霉（Aspergillus niger），卡门柏青霉（Penicillium camembertii），产碱杆菌（Alcaligenes sp.），伯克霍尔德氏菌（Burkholderiasp.），疏棉状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosa），或粘稠杆菌（Chromobacterium viscosum）表达的磷脂酶；通过基因工程，蛋白质工程改造而得的磷脂酶A1，或市售的磷脂酶A1。 

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载体和磷脂酶A1的比例为1:0.5～1:5，优选为1:0.8～1:1.2。 

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载体和磷脂酶A1的固定化时间为1～30小时，优选为2～8小时。 

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤b）中的干燥方式选自流化床干燥、自然干燥或真空干燥。 

8.一种固定化磷脂酶A1或其包装产品，其特征在于，所述固定化磷脂酶是通过权利要求1-7中任一项所述的方法制得。 

9.权利要求8所述的固定化磷脂酶或其包装产品用于催化酯化、酸解或水解反应的用途。 

10.一种进行酯化、酸解或水解反应的方法，所述方法包括使用权利要求9所述的固定化磷脂酶A1作为催化剂。