[发明专利]一种石油烃降解菌耐盐特性微量化检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于环境微生物检测技术领域，涉及一种石油烃降解菌耐盐特性微量化检测试剂盒。

技术背景

大多数石油污染通常发生在高盐环境中，例如石油污染盐渍化土壤、石油污染海水和石油污染高盐废水等。目前，石油污染高盐环境的治理已经引起人们的重视，特别是采用添加石油烃降解菌的生物方法是一种治理石油污染高盐环境的有效策略。其中，石油烃降解菌的耐盐特性是影响治理效果的关键。只有耐盐性较好的石油烃降解菌才能在高盐环境中生存，从而进一步降解石油烃，消除石油污染。因此，石油烃降解菌的耐盐特性是考察其是否能应用于石油污染高盐环境治理的重要特征。

目前用于检测石油烃降解菌耐盐特性的方法主要是摇瓶检测法。通常需要配制10～100ml含有不同浓度NaCl的液体培养基，接入待测的石油烃降解菌，经过一定时间的培养，通过测定菌体浓度的变化来判断石油烃降解菌的耐盐特性。该方法操作过程较为繁琐、试剂消耗量大、占用设备空间大，产生的测试废液较多，并且通量较低。采用高通量的微量化测定试剂盒是解决这一问题的有效途径。目前，微量化测定试剂盒已经广泛应用于多种指标的测定。例如：中国专利（201020629009）公布了一种采用微孔板检测饲用植酸酶活性试剂盒，以微孔板为反应载体，结构简便、使用方便，大大了提高工作效率，实现了大量样品的同时测定；中国专利（201220134074）公布了一种羟基维生素D检测试剂盒，微孔内包被有高特异性鼠羟基维生素D单克隆抗体层，提高了测定的线性范围；美国专利（US6428974B1）公布了一种用于抗菌药品测试的微孔板，具有操作简单、重复性好的优点；欧洲专利（EP1865074B1）公布了一种用于反转录PCR的微孔板，大大简化了反转录PCR的操作。因此，采用微量化测定试剂盒检测石油烃降解菌的耐盐特性具有较强的技术可行性。然而，目前国内外并没有石油烃降解菌耐盐特性微量化检测试剂盒的相关专利。

发明内容

针对石油烃降解菌耐盐特性传统检测方法操作过程较为繁琐等缺陷，本发明的目的是提供一种操作过程简单、试剂消耗量少、占用设备空间小、测试废液少和通量高的石油烃降解菌耐盐特性微量化检测试剂盒。

本发明的技术方案概述如下：

一种石油烃降解菌耐盐特性微量化检测试剂盒，包括96微孔板和显色剂，所述96微孔板的孔中设置有原油和NaCl晶体，所述原油的量为1～10mg/孔，所述NaCl晶体在每孔中的质量不同，NaCl晶体的质量在微孔中在1mg-51mg范围呈质量梯度递增设置，或在10mg-100mg范围呈质量梯度递增设置，所述显色剂是质量百分浓度为0.1%～1%的碘硝基四氮唑水溶液。

所述原油的量优选为5mg/孔。

优选的是：NaCl晶体的质量在微孔中在1mg-51mg范围呈质量梯度递增设置为1mg、6mg、11mg、16mg、21mg、26mg、31mg、36mg、41mg、46mg和51mg或1mg、11mg、21mg、31mg、41mg和51mg。

优选的是：NaCl晶体的质量在微孔中在10mg-100mg范围呈质量梯度递增设置为10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg和100mg或10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg和100mg。

优选的是：显色剂是质量百分浓度为0.5%的碘硝基四氮唑水溶液。

本发明的优点：

①操作过程简单，仅需要稀释石油烃降解菌等操作；

②试剂消耗量少，检测一个样品仅需几毫升试剂；

③占用设备空间小，检测一个样品仅占用约0.1L的培养箱体积；

④试废液少，检测一个样品仅产生几毫升废液；

⑤通量高，可同时测定数十组石油烃降解菌。

具体实施方式

本发明提供一种石油烃降解菌耐盐特性微量化检测试剂盒原理为：将石油烃降解菌用BH培养基等无机盐培养基稀释，加入到本发明试剂盒的96微孔板的微孔中。由于96微孔板的不同的孔中设置有原油和不同重量的NaCl晶体，因此形成了不同盐浓度的培养基。石油烃降解菌培养过程中仅在合适的盐浓度下生长，其生长情况可以通过添加显色剂碘硝基四氮唑后观察其颜色变化来测定。