[发明专利]异源高效表达脂肪酶的重组毕赤酵母

权利要求书

1.含自身前导肽的米黑根毛霉脂肪酶Pro-RML，其氨基酸序列为：

a）SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

b）SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经替换、缺失、或添加一个或几个氨基酸残基形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.编码权利要求1所述米黑根毛霉脂肪酶Pro-RML的基因。

3.如权利要求2所述的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

4.含有权利要求2或3所述基因的重组载体。

5.如权利要求4所述的重组载体，其为pPICZαA-pro-rml或pPICZαA-2pro-rml。

6.权利要求4或5所述的重组载体转化的宿主细胞。

7.如权利要求6所述的宿主细胞，其为巴斯德毕赤酵母X-33。

8.一种制备含自身前导肽的米黑根毛霉脂肪酶Pro-RML的方法，其通过培养权利要求6或7所述的宿主细胞，诱导含前导肽的脂肪酶表达获得含前导肽的米黑根毛霉脂肪酶Pro-RML。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述培养条件为28℃，初始pH为7.0，200rpm培养120-190小时；诱导条件为每24小时补充一次诱导物甲醇，至甲醇终浓度为1.0％。

10.权利要求1所述含自身前导肽的米黑根毛霉脂肪酶Pro-RML在水解三酰甘油及生物柴油制备中的应用。