[发明专利]针对微小RNA-21种子序列的反义寡聚核苷酸及应用

说明书

技术领域

本发明属于药物制备领域，具体涉及一种针对微小RNA-21种子序列的反义寡聚核苷酸及应用。

背景技术

microRNA（miRNA）是一类长度约22个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA，参与细胞的分化、增殖和调亡、个体发育、机体代谢等生理过程。miRNA5'端的“种子序列”（miRNA5'端7-8个核苷酸序列）与其靶基因mRNA的3'非翻译区（3'untranslated region，3'UTR）进行碱基完全互补配对，促进靶基因mRNA降解或抑制mRNA翻译，从而对靶基因的表达水平进行转录后调控。

至2012年8月，已有21264条目miRNA序列记载于人类基因组中（Sanger miRBasel9.0数据库）。有研究发现属于ncRNA范畴的miRNA不仅在胚胎发育和细胞分化上发挥关键作用，也与肿瘤的发生、发展有着密切的关系。约有50％的miRNA集中于肿瘤基因组的脆性位点区或者与癌症相关的区域，几乎所有的肿瘤都有异常表达的miRNA，通过miRNA芯片检测发现，在多发性骨髓瘤患者的骨髓瘤细胞中，miRNA-29b表达水平显著降低，miR-106b-25群（cluster）、miR-181a/b和miR-19a/b表达则相对升高。通过本课题组的实验发现在慢性粒细胞株K562中，miR-181a表达下调。一系列研究表明，miRNA在多种肿瘤中既可作为抑癌基因下调癌基因的表达，也可作为癌基因下调抑癌基因的表达。并且在不同的肿瘤组织或细胞内，miRNA具有特定的表达模式，明显的组织特异性。miRNA对靶基因表达的调控为揭示肿瘤的发病机制、指导治疗及判断预后方面提供了新的机遇。

miR-21是miRNA家族中的一个亚型，位于17q23.2染色体FRA17B脆性区域上，是具有自主转录单位的miRNA，并且有高度保守性。Chan等（Chan J A，Krichevsky A M，Kosik K S，et a1．Cancer Res，2005，65(14)：6029）首次发现miR-21在人恶性胶质瘤中高表达，并通过抑制细胞凋亡促进肿瘤的发生。对肿瘤样本或细胞株中的miRNAs的表达水平进行转录图谱研究，发现miR-21负性调节STAT3、PTEN、PDCD4、AP1、TGFβ等多种靶基因，在多种实体瘤（肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌、头颈部肿瘤、食管癌等）以及非实体瘤（慢性淋巴细胞性白血病、B细胞性淋巴瘤等）中高表达，起着致癌基因的作用。miR-21与肿瘤的转移侵入也有密切关系。通过一系列的实验方法调节miR-21在肿瘤中的表达，能够减少肿瘤的增殖，抑制肿瘤的转移及侵入。所以，敲除或抑制miR-21的表达，使其失去癌基因的功能，就可以在一定程度上治疗相关癌症。研究表明，miR-21可以作为癌症诊断以及治疗的一种新的生物标志物（Zheng J，Xue H，Wang et a1．J Cell Biochem，2011，112：872-880．）。因此，miRNA-21可能成为多种癌症治疗新的靶点。

慢性粒细胞白血病以及多发性骨髓瘤都是恶性增殖性疾病，传统的化学药物都存在一定的毒副作用，因此急需寻找新的药物。已有研究结果表明microRNA-21在包括慢性髓系白血病的多种癌症中高表达，并且对肿瘤细胞的增殖和迁移起到明显的促进作用，提示拮抗microRNA-21的表达可能成为慢性髓系白血病等肿瘤治疗的新靶点，针对microRNA-21靶点的药物开发成为一个亟待解决的应用。

目前研究miR-21的表达调控的方法有RNA干扰技术、反义核酸技术和miRNA海绵技术等。由于成熟miRNA只有21nt，反义核酸技术表现出明显的优势，基于miRNA的作用机制，使用seed-targeting tiny LNA（Susanna Obad,Camila O dos Santos,Andreas Petri etal.Nature genetics,2011,43(4):371-378.）作用于microRNA取得一定成效。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种针对微小RNA-21种子序列的反义寡聚核苷酸。

本发明的再一目的在于提供上述针对微小RNA-21种子序列的反义寡聚核苷酸的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种针对微小RNA-21种子序列的反义寡聚核苷酸（t-antimiR-21），其核苷酸序列如下：ATAAGCTA。

所述的反义寡核苷酸经过全硫代修饰。