[发明专利]一种毒三素链霉菌及其在制备利普司他汀中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型微生物及其用途和应用，尤其涉及一种毒三素链霉菌及其在制备利普司他汀中的应用。

背景技术

利普司他汀为发酵产物，通过毒三素链霉菌（Streptomyces toxytricini）发酵液培养，得到发酵滤液，再通过提取、浓缩得到利普司他汀浓缩液，经一系列纯化工艺如氢化、结晶、离心等可最终获得奥利司他成品。而奥利司他是一种长效和强效的特异性胃肠道脂肪酶抑制剂，它通过与胃和小肠腔内胃脂肪酶和胰脂肪酶的活性丝氨酸部位形成共价键使酶失活而发挥治疗作用，失活的酶不能将食物中的脂肪，主要是甘油三酯水解为可吸收的游离脂肪酸和单酰基甘油。未消化的甘油三酯不能被身体吸收，从而达到减少热量摄入，控制体重的目的。服用奥利司他可以降低与肥胖相关的危险因素和与肥胖相关的其它疾病的发病率，包括高胆固醇血症、2型糖尿病等。

一般的利普司他汀产生菌，生产能力不稳定，产量较低，发酵副产物较多，杂质较多，导致后期提取、氢化、纯化成奥利司他的工艺较为复杂，大大地增加了后序的提纯难度，难以获得高纯度的最终产物，从而无法产业化生产。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种发酵单位高、能稳定生产、产量高且副产物少的利普司他汀产生菌。

一种毒三素链霉菌ST-5423，分类命名为毒三素链霉菌ST-5423（Streptomyces toxytricini ST-5423），由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为：CCTCC M2013312，保藏日期为：2013年07月04日。

毒三素链霉菌ST-5423的菌株的菌落特征：基内菌丝发育良好，无色，菌丝细长分枝，直径为0.8～0.9μm；气生菌丝生长丰茂、粉状，孢子丝着生在气生菌丝体上，孢子丝直、柔曲，孢子呈椭圆形至柱形，表面光滑，直径为0.65～1.0×1.0～2.0μm，成熟孢子链孢子个数在10个以上。酵母浸出物淀粉琼脂：气丝白色至肉桂粉色。

根据微生物形态学及国外相关资料的描述，结合毒三素链霉菌ST-5423的菌株的各种培养特征和形态特征，该毒三素链霉菌ST-5423的菌株应属于毒三素链霉菌属，定名为Streptomyces toxytricini ST-5423。

本发明的另一个目的是提供该菌株在制备利普司他汀中的应用。

毒三素链霉菌ST-5423的菌株可应用于发酵制备利普司他汀。该制备方法包括下列步骤：

a. 发酵菌株采用毒三素链霉菌ST-5423的菌株；

b．菌株培养：按常规方法制备的斜面，挖取斜面菌苔块，接入摇瓶进行种子培养得摇瓶种子液；将摇瓶种子液接种于摇瓶发酵培养基中或种子罐中培养；将种子罐培养液接种于发酵罐培养基培养，收集发酵液； 优选在发酵培养过程中无需进行补料，待种子罐菌丝生长良好接入发酵罐后，根据发酵液实际情况从pH、菌浓、搅拌转速、溶氧及菌丝镜检情况等方面来控制发酵过程即可。

c. 发酵产物提取：提取、浓缩、氢化、结晶、制备柱、结晶和干燥。

其中所述的步骤b为：按常规方法制备的斜面，挖取斜面菌苔块接入摇瓶种子培养基，150～250rpm，培养24～48小时，得摇瓶种子液；将摇瓶种子液按种子罐培养基体积0.1～2%的接种量接种于种子罐。搅拌速度80～120rpm，培养24～48h；将种子罐培养液按发酵培养基体积5～15％的量接种于发酵罐培养基，搅拌速度120～200rpm，发酵培养130～240小时，收集发酵液；其中培养温度均为26～28℃。

本发明还公开了培养基：按重量体积比计，摇瓶、种子罐培养过程中的碳源为0.2～5.0％，优选0.5～4.5％，最优选为0.5～3.0％；氮源为0.2～4.0％，优选0.5～3.5％，最优选为0.5～3.0％；无机盐为0.02～2.0％，优选0.02～1.5%，最优选0.02～1.3%；其余为水；

其中碳源选自麦芽糊精、淀粉、可溶性淀粉、淀粉水解糖、糖蜜、糊精、甘油、葡萄糖、土豆浸出粉、土豆糊精、燕麦片的一种或几种；优选麦芽糊精、淀粉、可溶性淀粉、糊精、甘油、葡萄糖、土豆糊精、燕麦片中的一种或几种；最优选麦芽糊精、淀粉、可溶性淀粉、甘油、葡萄糖、土豆糊精中的一种或几种。