[发明专利]表达新型defensin抗菌肽的DNA

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及表达抗菌肽的DNA。

背景技术

目前，由于过度追求经济效益，高密度、集约化的珍珠养殖模式快速发展，使得养殖病害日趋严重，各种病害频繁爆发，已成为淡水珍珠养殖业健康可持续发展的主要瓶颈。各类农药、抗生素盲目无序和频繁使用，不仅对病害的预防与治疗没有起到明显作用，而且，由于这些药物的大量使用严重破坏了自然生态环境，药品的残留已经直接威胁到人类的健康，因此，发现和寻找通用性强、防治效果好、广谱无污染的新型病害预防和治疗药物，成为人们亟待解决的重要课题之一。抗菌肽（Defensin）又称抗微生物肽，是参与动物先天性免疫防御功能的重要组分，具有广谱杀菌、抑病毒、抑真菌、抑寄生虫等作用的一类膜活性多肽，不易引进微生物的耐药性，成为抗生素药物的理想替代品。抗菌肽作用机理非常独特，研究表明，抗菌肽作用于细菌细胞膜，使细胞膜发生穿孔，破坏膜的完整性，使细菌因不能保证正常渗透压而死亡（Park, Y., Biochim Biophys Acta. 2003, 1645(2): 172-182）。

Defensin是贝类抗菌肽中的一大类群，其典型特征是分子内具有6个或8个保守的半胱氨酸残基组成的二硫键，二级结构包括一个α螺旋和两个反向平行的β折叠，分子量约3-5 kDa。在紫贻贝(M. galloprovincialis)、太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）、海湾扇贝(Argopecten irradians)和菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)等海水贝类中都有研究过Defensins。研究表明，病原菌刺激贻贝(Mytilus. galloprovincialis)后可增强defensin在血淋巴中的转录表达。从牡蛎（Crassostrea gigas）的鳃组织中分离纯化到defensin蛋白对革兰氏阳性和阴性菌均具有较强抑菌活性（Seo, et al., Biochem Biophys Res Commun, 2005, 338 (4): 1998-2004）。此外，已证明无论是化学合成或体外重组表达的一些海水贝类defensins均能表现出较强的杀菌功效（Adhya, et al., Comp Biochem Physiol B. 2012, 161(1):25-31; Gueguen, et al., J Biol Chem, 2006, 281(1): 313-23; Xu and Faisal, Molecular Immunology, 2010, 47: 2138-2147; Zhao, et al., Molecular Immunology, 2007, 44 (4): 360-368; Zhao, et al., PLoS One, 2010, 5(10): e13480）。

发明内容

本发明涉及一种表达新型Defensin抗菌肽的DNA，所表达出的新型Defensin抗菌肽具有良好的抗菌性能。

具体技术方案如下：

表达新型defensin抗菌肽的DNA，序列如SEQ：1所示。

所述DNA编码的新型defensin抗菌肽：(a)其氨基酸序列如SEQ:2所示；或(b) 将（a）中的序列经过一个或多个氨基酸的取代，缺失或添加具有抗菌肽功能的由(a)衍生的新型defensin抗菌肽。

本发明还涉及：

表达新型defensin抗菌肽的DNA的载体。

所述表达新型defensin抗菌肽的DNA的载体为pGEX-4T-1-defensin。

由于抗菌肽天然资源有限，鉴于化学合成肽类成本高，而基因工程方法大量生产抗菌肽的途径较为现实，并显示出良好应用前景。本发明主要是在一种淡水珍珠贝类鉴定发现了一种抗菌肽Defensin基因序列，并采用一种基因工程手段获得了其产物，抑菌实验分析证明其能够显示出较强抑菌活性。因此，我们有望通过较廉价大规模的基因工程重组方法获得大量的此类抗菌肽，将其应用在淡水珍珠养殖过程中既能有效地防治的各种疾病的发生，又可避免了滥用抗生素带来的日益严重的微生物对抗生素的耐药性问题，同时极大地降低了珍珠养殖过程中用于其病害防治的药物经济成本。