[发明专利]枯草芽孢杆菌BS01与灵芝孢子粉的组合物在改善睡眠中的应用

说明书

技术领域

 本发明涉及枯草芽孢杆菌BS01与灵芝孢子粉的组合物在改善睡眠中的应用。

背景技术

进入21世纪，随着社会竞争的加剧，生活节奏的加快，失眠症的发病率呈上升趋势。医学研究表明，失眠可给人带来焦虑、抑郁、注意力不集中、记忆出现障碍等后果给患者生活带来严重的影响。

因此，研究开发改善睡眠的生物制品对预防疾病保护人类的身心健康具有重要的意义。然而，目前改善睡眠的方法研究多集中在安定、褪黑素、苯二氮卓类、非苯二氮卓类(如扎来普隆、唑吡坦、曲唑酮等)、细胞因子及植物提取物等方面。这些物质虽然具有一定改善睡眠的效果，但长期服用会产生依赖性与毒副作用。研制既安全有效又绿色环保的改善睡眠的生物制品成为当前医学研究中的一个重要课题。

目前已有研究表明芽孢杆菌具有提高动物生产性能、增加饲料利用率、促进机体免疫、抗菌防病及促进动物胃肠道微生态平衡等功效，在工业、农业、食品、医药和饲料等行业被广泛应用。但国内外还未有对其改善睡眠方面的相关报道。

研究发现，作为灵芝种子的灵芝孢子粉具有镇定、安神、脑保护、促进神经再生和改善睡眠质量的作用，并越来越多的被运用在各类保健品中。灵芝孢子粉可通过灵芝多糖调节神经系统影响松果体对褪黑素的分泌从而显著缩短小鼠的睡眠潜伏时间，并且可显著提高戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠发生率。此外，灵芝孢子粉对中枢神经系统有明显的镇静作用，并能增强巴比妥类药物的中枢抑制作用。

随着对药物危害的认识，中草药以其无毒害副作用受到人们的青昧。大量研究表明，中药可促进益生菌的增殖，将益生菌与中药联合应用，不仅具有无毒、无害和无污染的特点，而且还可通过相互的促进作用加强疗效。但目前尚未见到枯草芽孢杆菌联合灵芝孢子粉改善睡眠的相关报道，也未见其相关产品。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一株枯草芽孢杆菌BS01 CCTCC NO:M2012485与灵芝孢子粉的组合物在改善睡眠中的应用。其中，改善睡眠的制品可以是药品、保健品或饮食品。

本发明所述的菌株为枯草芽孢杆菌BS01，于2012年11月28日保藏于中国典型培养物中心，保藏号为 CCTCC NO:M2012485，地址为：湖北省武汉市武汉大学。

本发明参考益生菌可用于临床上预防和治疗动物疾病的思维，从土壤中筛选出耐酸、耐胆盐的枯草芽孢杆菌BS01，然后利用该菌与灵芝孢子粉的组合物在改善睡眠中的应用，证明添加本发明组合物后，可以有效地改善小鼠睡眠质量和提高其抗氧化性能。

具体讲，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

本发明获得具有耐酸、耐胆盐的枯草芽孢杆菌BS01的方法是：采集土壤，用蒸馏水稀释后，用不同筛选培养基进行分离培养和鉴定，得到一株耐酸、耐胆盐的枯草芽孢杆菌。通过PCR扩增出该菌株的16S rDNA片段，经测序获得目的基因序列。用美国生物信息学中心（NCBI）的BLAST程序对所初步获得的该菌株的16S rDNA序列进行登录，获得登录号为JQ086378.1 (GenBank(Http: //ww w.ncbi.nlm.nih. gov/ blast/)，与已收录的序列进行核苷酸同源性比较。经过微生物学分类鉴定，确定该分离的菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BS01，该菌株已于2012年11月28日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心（CCTCC）保藏，保藏编号为：CCTCC NO:M2012485。

本发明枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BS01按照常规甘油冷冻方法保藏。

本发明也提供枯草芽孢杆菌BS01与灵芝孢子粉的组合物在改善睡眠中的应用。根据国家保健食品管理法规的有关规定，采用昆明小鼠，在饲喂基础日粮的同时，分别用灭菌生理盐水、枯草芽孢杆菌菌液、灵芝孢子粉稀释液及枯草芽孢杆菌菌液联合灵芝孢子粉稀释液连续30天灌胃小鼠，在实验前后分别称量其体重，实验结束后测定睡眠时间、阈下催眠入睡率、丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性等来判断枯草芽孢杆菌BS01CCTCC NO: M2012485联合灵芝孢子粉是否具有改善睡眠的作用。

附图说明

图1为本发明枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BS01的总DNA的2%琼脂糖凝胶电泳检测图，其中M为λ/HindIII DNA Marker。