[发明专利]转基因番茄的组织培养方法

说明书

所属领域：

本发明属于生物技术领域，涉及一种转基因番茄的组织培养方法，更具体涉及一种已转入雨生红球藻中的酮化酶和羟化酶基因的富含虾青素的转基因番茄的组织培养方法。

背景技术：

番茄(Lycopersicon esculentum)是茄科(Solanaceae)番茄属(Lycopersicon)一年生或多年生植物，在世界各地广泛种植。1983年Fraley等(Fraley,1983) 首次将细菌基因导入植物细胞获得成功表达，1994年美国Calgene公司将多聚半乳糖醛酸酶的反义cDNA转入到番茄的基因组中，首先研制出延迟成熟的转基因番茄品种，并被批准用于商业化生产，这为研制转基因番茄提供了可行性。随着植物基因工程技术的发展，以番茄作为生物反应器生产有生物活性的天然产物已成为国内外研究的热点，受到国内外科学家的极大关注。

虾青素是分子结构独特的酮式类胡萝卜素，具有极强的抗氧化活性以及抗辐射，抗衰老、抗肿瘤和预防心血管等疾病的功能(Chien, 2005)。虾青素的生物合成只发生于少量细菌和绿藻中，且产量很低（Kajiwaraetal,1995; Lotant,1995; Misawa et al., 1995; Fernández—González et al., 1997). 由于虾青素的自然资源有限，科学家们都在通过基因工程寻求不同的植物来生产更高产量的天然虾青素。黄俊潮等（2013）通过基因工程方法将绿藻中筛选和分离到能催化植物细胞中β-胡萝卜素和玉米黄素成虾青素的酮化酶和羟化酶基因转入野生型番茄植株(cv.UC82B)中，获得了一种富含虾青素的转基因番茄，其成熟果实内虾青素的含量达到16.1mg／g,以此种转基因番茄作为生物反应器生产虾青素具有极大的商业前景。

若要将转基因番茄进行商业化生产，组织培养技术是解决其规模化高效繁殖的重要技术之一。目前对于转基因番茄特别是富含虾青素的转基因番茄的组织培养未见报道。

发明内容：

本发明旨在提供一种转基因番茄组织培养方法，特别提供一种富含虾青素的转基因番茄的组织培养。该方法利用5000lux的培养光照进行富含虾青素的转基因番茄的组织培养，使转基因番茄愈伤组织分化成苗的数量最多，玻璃化，褐化及死亡率最低。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

转基因番茄的组织培养方法，将转基因番茄种子萌发幼苗栽培在普通温室中50天，取其幼嫩叶片消毒放入MS基本培养基+ZT（2mg/L）+IAA(0.05mg/L)，30g/L的蔗糖，8.5g/L琼脂的愈伤组织诱导培养基中，调节PH值至5.8诱导愈伤组织，其培养条件为温度25℃，光照强度为3000lux，光照时间为12h，相对湿度为60%，培养20天后，诱导出绿色半透明愈伤组织，将此愈伤组织继代入盛有MS基本培养基+ZT（1mg/L）+IAA(0.03mg/L)，再加入30g/L的蔗糖，8.5g/L琼脂的分化培养基的玻璃瓶中，调节PH值至5.8，将接入愈伤组织的玻璃瓶放入光照强度为2500lux,5000lux,10000lux,20000lux四种光照强度下培养，温度为25℃±1℃，湿度60%±5%，二氧化碳浓度400ppm±50ppm，光照时间为12小时/天的培养室中，每30天继代1次，培养90天。

如所述的转基因番茄的组织培养方法，所述的转基因番茄种子为已转入雨生红球藻中的酮化酶和羟化酶基因的富含虾青素的转基因番茄种子。

如所述的转基因番茄的组织培养方法，所述的转基因番茄种子愈伤组织培养光照强度为5000lux,20000lux。

如所述的转基因番茄的组织培养方法，所述的转基因番茄种子愈伤组织培养光照强度为5000lux。

与现有技术相比，本发明的转基因番茄的组织培养方法其分化芽的数量达到16个左右，芽的玻璃化比例为20%，褐化率和死亡率分别为0，8%，在5000lux的光照条件下，转基因番茄愈伤组织分化成苗的数量最多，玻璃化，褐化及死亡率最低。因此本发明富含虾青素的转基因番茄的组织培养方法具备突出的优益性和显著的特点。

具体实施方式：

下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

转基因番茄的组织培养：