[发明专利]乳酸链球菌的发酵工艺

权利要求书

1.乳酸链球菌的发酵工艺，其特征在于，将乳酸链球菌（Streptococcus lactis）在改良MRS固体培养基上进行传代培养，然后将活化后的乳酸链球菌接种到液体种子培养基中进行静止培养，所得种子液按2～5%的接种量接种到发酵培养基中，经过扩大培养得到乳酸链球菌发酵液；

其中，所述发酵培养基的配方为：豆粕粉15～25g/L、玉米粉10～20g/L、蔗糖5～10g/L、蛋白胨5～10g/L、酵母膏3～5g/L、番茄汁50mL/L、磷酸二氢钾2g/L、结晶硫酸镁0.5g/L，pH值6.2～6.9；发酵培养条件为：30～35℃，溶解氧0%，间歇式旋转环境中培养20～45h。

2.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于，所述改良MRS固体培养基的配方为：葡萄糖10～20g/L、蛋白胨10～15g/L、酵母膏5～7.5g/L、牛肉膏10～15g/L、磷酸二氢钾0.2g/L、乙酸钠2g/L、柠檬酸三胺2g/L、结晶硫酸镁0.5g/L、琼脂18g/L、水1000mL，pH值6.2～6.9；所述传代培养是指将乳酸链球菌菌株接种到改良MRS固体斜面培养基上，于30～35℃培养3～5天。

3.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于，所述液体种子培养基的配方为：豆粕粉15～25g/L、玉米粉10～20g/L、蔗糖5～10g/L、蛋白胨5～10g/L、酵母膏3～5g/L、牛肉膏3～5g/L、磷酸二氢钾0.2～2g/L、乙酸钠2～5g/L、柠檬酸三胺2g/L、结晶硫酸镁0.5g/L、水1000mL，pH值6.2～6.9；静止培养的条件为：30～35℃，每隔6h摇瓶一次，静止培养18～24h。

4.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于，所述扩大培养是指进行三级发酵：将种子液按2～5%的接种量接种到100L发酵罐中进行发酵培养，发酵完成后，将该罐发酵液全部转接入1000L发酵罐中，继续发酵培养，完成后，将1000L罐中发酵液全部转接入10000L发酵罐中进行发酵培养，得到发酵产物；其中，各发酵罐的装液量为60～70%。

5.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于，所述发酵培养基中添加的番茄汁，其制备方法为：番茄清洗后置于90～95℃水中5～10min，然后将番茄剥皮后榨汁，调pH值6.2～6.9，100～110℃高压蒸汽灭菌10～15min，即得。

6.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于，所述乳酸链球菌为ACCC10295。

7.乳酸链球菌菌剂的制备方法，将根据权利要求1-6任一项所述发酵工艺制备的乳酸链球菌发酵液与保护剂混合，然后将所述混合物用海藻酸钠溶液进行包埋处理，冷冻干燥后，即得乳酸链球菌菌剂；

其中，所述保护剂为纯度在99%以上的大豆粉。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，将乳酸链球菌发酵液与灭菌后的大豆粉按1:3～6的重量比混合。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述包埋处理具体为：将所述混合物与3～5%的海藻酸钠溶液按1:3～5的重量比混合。

10.根据权利要求7-9任一项所述方法制备的乳酸链球菌菌剂。