[发明专利]一种评价缺血后脑功能损伤的动物模型的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物模型制备领域，尤其涉及一种评价缺血后脑功能损伤的动物模型的制备方法。

背景技术

现有的缺血动物模型大体上可以分为四类，即动脉闭合模型、局部注射内皮素、血氧剥夺和光栓模型。

一，动脉闭合模型

手术分离动物颈总动脉或大脑中动脉，通过外加手术线结扎或注入纤维、血栓等造成特定区域的缺血。

二，局部注射内皮素

在特定的血管注射内皮素，引起血管收缩，从而引起一过性的(仅2h)的缺血。

三，血氧剥夺。

在离体脑片或培养神经元水平，把细胞或组织放入一个低氧、低糖的人工脑脊液(ACSF)中，从而模拟在体水平上的缺血。

四、光栓模型

1985年，Watson等人发现腹腔或静脉注射光敏剂玫瑰红(Rose Bengal)后，在特定脑区给予一定强度的光照，在光照区会引起血管内壁过氧化，从而募集血小板聚集形成血栓。

腹腔注射戊巴比妥钠麻醉动物后，腹腔或静脉注射玫瑰红，吸收一段时间后，暴露颅骨，把动物固定在立体定位仪上，把光纤定位于特定脑区，给予一定强度的光照。动物下架，缝合颅骨表面。待动物清醒后放回饲养箱。待动物恢复后进行行为学检测。

脑卒中存活下来的病人大多伴有功能损伤，比如记忆受损、情绪紊乱(如中风后抑郁)、运动能力受损、语言表达能力受损等等。现有的抗缺血药物即使少数能够挽救病人的生命，也无法改善后续的功能损伤，造成沉重的社会负担。

原因就在于大部分药物在临床前研究阶段只做了组织学实验，而没有做功能水平，也就是行为学水平的验证。所以，大部分的药物不能挽救病人的生命或导致病人后续的生存状态下降。比如，手术闭合模型中，动物在手术后需要经过一定时间的恢复，不能检测缺血当时的行为学改变；而且，即使是大脑中动脉闭合也不能特异的损伤某一特定脑区，而是一片区域。内皮素的作用仅能维持2h，仅能研究一过性的缺血。血氧剥夺(OGD)在离体水平建模，自然也就不涉及行为学变化。已有的光栓模型是在麻醉动物水平上造模，也涉及手术后恢复的问题。因此以上模型都不能有效进行行为学检测。

发明内容

针对上述问题，本发明实施例提供了一种评价缺血后脑功能损伤的动物模型的制备方法。

本发明实施例是这样实现的，一种评价缺血后脑功能损伤的动物模型的制备方法，该方法包括以下步骤：埋管、缺血造模和检测动物的行为学改变。

进一步，埋管的具体步骤为：

腹腔注射戊巴比妥钠麻醉动物，暴露与拟研究的脑区相应的颅骨区域；

把动物固定于脑立体定位仪上，在相应的颅骨表面钻孔，将光纤导管下到相应脑区之上，但并不损伤该脑区；

在颅骨其他区域打颅钉；

用牙科水泥覆盖暴露的颅骨表面，待牙科水泥固定后，动物放在恢复台上恢复，清醒后放回饲养笼。

进一步，缺血的具体步骤为：

腹腔注射玫瑰红后放回饲养笼，通过光纤导管插入光纤，动物处于清醒状态下给予光照，光照后造模结束。

进一步，检测动物的行为学改变可以在造模的同时进行，也可以在造模后特定时间进行。

进一步，用牙科水泥覆盖暴露的颅骨表面包括颅钉和光纤导管下部。

进一步，光纤导管在目标脑区以上0.5mm，光纤比导管长0.4-0.5mm，所以可以避免目标脑区受到机械损伤。

进一步，动物埋管后饲养恢复的时间为7天。

进一步，在所研究动物脑区埋置光纤导管，光纤导管的位置为目标脑区以上0.5mm，放回饲养笼恢复7天；手术后第3天起，每天抚摸动物，使其适应实验者，实验前3天起，每天将动物放入缺血箱使其适应环境；埋管手术后第7天，腹腔注射玫瑰红，放回饲养笼吸收1h后，将动物放入缺血箱中，拔出堵管，将光纤插入光纤导管，给予473nm光照，所研究动物每侧光照0.5h，光照结束后，插回堵管，进行行为学检测。