[发明专利]去甲氯胺酮蛋白结合化合物

说明书

背景技术

氯胺酮[ketamine，R,S-2(O-氯苯基)-2-(甲氨基)环己酮]是分离麻醉剂，已广泛用在临床实践中长达25多年。氯胺酮在亚麻醉剂量下还是有效的镇痛剂。氯胺酮经由CYP-450N-去甲基经历强的肝脏代谢，成为去甲氯胺酮（norketamine，NK）。细胞色素P4503A4是引起氯胺酮N-去甲基成为去甲氯胺酮的主要酶。环己酮环还进行氧化代谢，形成第二代谢物去氢去甲氯胺酮（DHNK）。这两种代谢物，特别是NK，可有助于氯胺酮的药物作用。

盐酸氯胺酮作为人和兽医用途的麻醉剂而销售。氯胺酮，也称为“K”，产生与苯环己哌啶（PCP）所产生作用相似的作用，具有LSD的视觉作用。结果，氯胺酮滥用的潜在性并不令人惊讶。氯胺酮在受试者中的浓度在约6～7700ng/mL的范围内。去甲氯胺酮在尿中的浓度在约7～8000ng/mL的范围内。可在约3天时间的尿中检测出氯胺酮使用。在接受药物治疗的人中，血液或血浆氯胺酮的浓度通常在0.5～5.0ug/mL的范围内，在因不清醒驾驶而被捕的人中通常为1～2ug/mL，在急性致死超剂量的受害者中通常为3～20ug/mL。去甲氯胺酮产生与氯胺酮相似的作用。去甲氯胺酮这种药学活性代谢物的存在，可用于氯胺酮摄取的确定。

发明内容

本发明涉及适体和使用方法。更具体地，本发明涉及与去甲氯胺酮相关的适体和检测方法。本发明提供能够与去甲氯胺酮结合并可用作去甲氯胺酮和氯胺酮摄取诊断的适体。本发明还提供复合物、治疗剂、试剂盒及前述这些的制备方法和使用方法（例如，诊断、治疗方法）。

一方面，本发明是包括一个以下核苷酸序列的适体：

5'-GAGGTGGGTGGGTGGGGCGGTTTTC-3'，（SEQ ID NO:1）

5'-GAGGTGGGTGGGTGGGGCGTTGTTT-3'，（SEQ ID NO:2）

5'-GAGGGGGGCGGGTGGGGCGTTATTC-3'，（SEQ ID NO:3）

在另一个方面，本发明是本文中与去甲氯胺酮特异结合的适体。

在另一个方面，本发明是本文中的适体，其中适体与去甲氯胺酮之间的离解常数（K_d）在10.6纳摩尔（nM）至134.6nM的范围内。

在另一个方面，本发明是本文中5’端被硫醇基、生物素（例如，生物素基）、发光标签（包括荧火虫荧光素酶和海肾荧光素酶）、荧光标签（异硫氰酸荧光素（FITC）、藻红蛋白（PE）、Cy3、和Cy5）、或酶（包括碱性磷酸酶（AP）、辣根过氧化物酶（HRP））修饰的适体。

在另一个方面，本发明是包括10～80个核苷酸的本文中的适体。

另一个方面，本发明是用于检测样品中去甲氯胺酮的检测方法，检测方法包括：提供本文中的适体；将样品与适体混合，从而使样品中的去甲氯胺酮与适体结合而形成去甲氯胺酮-适体复合物；以及检测去甲氯胺酮-适体复合物中的去甲氯胺酮或适体。

在另一个方面中，本发明是本文中的检测方法，还包括对所检测的去甲氯胺酮的水平进行传达（例如，口头、书面、电子介质）。在另一个方面，传达是针对卫生保健提供者。

在另一个方面，本发明是本文中的检测方法，其中适体用硫醇、生物素标签、发光标签（包括荧火虫荧光素酶和海肾荧光素酶）、荧光标签（异硫氰酸荧光素（FITC）、藻红蛋白（PE）、Cy3、和Cy5）、或酶（包括碱性磷酸酶（AP）、辣根过氧化物酶（HRP））标记。

本发明还涉及去甲氯胺酮的检测方法，其中，与常规的比色检测方法例如ELISA相比，使用Luminex检测系统的检测方法高度灵敏。

用于去甲氯胺酮的检测方法，适合于检测样品中的去甲氯胺酮，检测方法包括：提供多个与去甲氯胺酮共价结合的珠；使珠与标记的本文适体混合，从而使珠上的去甲氯胺酮与标记的适体结合；将链霉亲和素-藻红蛋白结合物加到与珠混合的样品中，从而使链霉亲和素-藻红蛋白结合物与标记的适体结合；除去未结合的链霉亲和素-藻红蛋白结合物；以及通过标记的适体来检测与珠结合的链霉亲和素-藻红蛋白结合物。

在另一个方面，本发明是本文中的检测方法，其中标记的适体用生物素标签（即，生物素化）标记。

另一个方面是包括本文适体的适体-珠复合物。在本发明的一个实施方式中，去甲氯胺酮与珠共价结合。

在另一个方面，本发明是还包括标签部分的适体-珠复合物。

另一个方面是制备本文中的适体-珠复合物的方法，包括使珠与本文的适体混合。