[发明专利]沉香倍半萜合酶蛋白ASS4及其编码基因和应用

权利要求书

1.沉香倍半萜合酶蛋白ASS4，其特征在于，所述蛋白为：

（1）SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（2）SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由（1）衍生的蛋白质。

2.权利要求1所述沉香倍半萜合酶蛋白ASS4的编码基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的cDNA序列如SEQ ID No.1所示。

4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为pET-28a-ASS4，其构建方法包括如下步骤：

（1）提取伤害处理后的白木香总RNA，以白木香总RNA为模板，合成cDNA的第一条链；

（2）以cDNA为模板，以引物ASSF和引物ASSR为引导进行PCR，扩增目的基因ASS4；

（3）将目的基因ASS4克隆至pGEM-T-easy载体，获得载体pGEM-T-ASS4；

（4）将载体pGEM-T-ASS4和pET-28a分别用BamHI和XhoI进行双酶切，回收ASS4基因片段和pET-28a载体片段，连接，获得重组表达载体pET-28a-ASS4。

6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于，步骤（2）中，PCR反应体系为：

ASSF：5’-ggATCCATgTCTTCggCAAAACTAggTTCT-3’；

ASSR：5’-CTCgAgTCAgATTTCAATAgCATgACgCAAC-3’。

7.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于，步骤（2）中，PCR反应程序为:95℃5min；95℃变性1min，69℃退火1min，72℃延伸2min，共16个循环，其中，每个循环退火步骤温度降1℃；95℃1min，54℃1min，72℃2min，共35个循环；72℃10min。

8.含有权利要求4-7任一项所述重组表达载体的宿主细胞。

9.一种制备沉香倍半萜合酶蛋白ASS4的方法，其特征在于，所述方法为将权利要求2或3所述基因或权利要求4-7任一项所述重组表达载体转化细菌或真菌，通过发酵生产所述沉香倍半萜合酶蛋白。

10.权利要求2或3所述基因在提高植物沉香倍半萜合成中的应用，其特征在于，所述应用为将权利要求2或3所述基因或权利要求4-7任一项所述重组表达载体转化植物，使所述植物具备相应的沉香倍半萜合酶活性，进一步生产沉香倍半萜。