[发明专利]一种基于点击化学的便携式检测组氨酸的方法

权利要求书

1.一种基于点击化学的便携式检测组氨酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）制备浓度为2.0 uM的修饰有炔基和蔗糖转化酶的DNA化合物；

（2）将商品化的修饰有链霉亲和素的磁珠溶于由0.1 M NaCl、0.1 M pH=7.3的磷酸盐缓冲溶液和0.05% 吐温-20组成的混合溶液中，加入2.0 uM修饰有生物素的DNA，室温振荡30±1分钟，制备修饰在磁珠上的DNA化合物；

（3）将修饰有炔基和蔗糖转化酶的DNA化合物与修饰在磁珠上的DNA化合物混合，加入10 nM CuSO₄、1 mM抗坏血酸钠和含有组氨酸的待测样品，室温培育1.5±0.5小时；

（4）用磁铁分离步骤（3）中的磁珠与混合溶液，用50 uL磷酸盐缓冲溶液洗涤磁珠三次后，加入10 uL磷酸盐缓冲溶液，再加入20 uL 1 M蔗糖溶液，于45℃反应15分钟；

（5）用罗氏血糖仪测定步骤（4）反应后的溶液，记录数据；

（6）根据组氨酸浓度和血糖仪响应差值，计算得到其线性方程为Y=4.089+1.904lgX，其中Y为血糖仪响应差值，单位为mM；X为其所对应的组氨酸浓度，单位为uM。

2.根据权利要求1所述的基于点击化学的便携式检测组氨酸的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的修饰有炔基和蔗糖转化酶的DNA化合物序列为从左到右5’到3’：炔基-TGTCCGTAGCTAAAAAAAAAAAAA-转化酶。

3.根据权利要求1所述的基于点击化学的便携式检测组氨酸的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的修饰有生物素的DNA序列为从左到右5’到3’：生物素-AAAAAAAAAAAATCACAGATGAGTAGT-叠氮基。

4.根据权利要求1所述的基于点击化学的便携式检测组氨酸的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的修饰有炔基和蔗糖转化酶的DNA化合物与修饰在磁珠上的DNA化合物的摩尔比为1:1。

5.根据权利要求1所述的基于点击化学的便携式检测组氨酸的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的含有组氨酸的待测样品的加入量为3 uL，CuSO₄和抗坏血酸钠的最终含量分别为1 nM 和0.1 mM。