[发明专利]一种对透明质酸钠进行分子量分级的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种透明质酸钠分子量分级的方法。特别涉及一种膜分离技术将透明质酸钠进行分子量分级的方法。

背景技术：

透明质酸，Hyaluronic acid，简写为HA，广泛存在于动物的皮肤、脐带、关节滑液、软骨、眼玻璃体、鸡冠、鸡胚、卵细胞和血管壁中。1934年由Meyer和Palmer首次在牛眼玻璃体中发现。HA是由葡萄糖醛酸和乙酰葡萄糖胺通过β1-3和β1-4糖苷键所构成的双糖单位重复连接而形成的线性高分子黏多糖，其分子量范围10⁵-10⁷，由于其溶液具有超强的保水性，粘弹性和生物易吸收性，已被广泛的应用于医药及化妆品等各领域。

目前商品化的HA一般为Na盐形式，为白色纤维状或粉末状固体，在较强的吸湿性，溶于水，不溶于有机溶剂，医用级相对分子质量为10×10⁵～25×10⁵，化妆品级为5×10⁵～15×10⁵。HA的高分子量是一种重要的药理学性质，由于HA分子量的重要性，对HA分子量的分级研究已经成为技术人员的研究热点。

膜分离技术作为一种生物工程下游技术，具有操作简便，分离效率高、无相变等优点，在有用物质的提取，不纯物质的去除中有广泛的应用和研究。通过对HA粗品溶液的膜过滤参数(PH、离子强度、透膜压力、切向流速、浓度)的调节，可以改变HA粗品对膜的透过率。其中，HA粗品溶液的pH对HA粗品对膜的透过率的影响比较显著，在pH3-9的范围内，pH值越高，HA分子对膜的透过率越低。而HA分子的分子量显然也对透过率有影响。因此，通过选择合适膜孔径的微滤卷式膜以及合适的HA粗品溶液的pH，可以经过微滤和超滤操作对HA进行分子量分级。

目前商品HA一般是通过马疫链球菌或重组枯草芽孢杆菌发酵生产。微滤及超滤技术在HA生产中的应用研究通常是在菌体分离及料液浓缩方面。尚未见此技术在对HA进行分子量分级方面的应用资料。

发明内容：

本发明的目的是提供一种HA分子量分级的方法。此方法可以用于透明质酸的生产过程中，或者用于对透明质酸粗品进行再处理，得到不同分子量的HA成品，能够更好的提高HA的商业价值。

为实现本发明的目的，本发明所采用的是膜分离技术。

本发明提供一种透明质酸钠分子量分级的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将透明质酸钠粗品溶于水中，浓度为0.1-0.6g/L。

2)根据需要，用6mol/L的NaOH和HCL调节透明质酸钠粗品溶液的PH值到pH3到pH9之间。

3)利用PVDF微滤卷式膜对透明质酸钠粗品溶液进行微滤，收集不能透过微滤膜的微滤浓缩液。

4)利用PES超滤卷式膜对微滤透过液通过超滤，收集超滤浓缩液。

5)两种浓缩液分别用2倍体积的95％乙醇沉淀。

6)沉淀物真空冷冻干燥得到两种不同分子量的透明质酸钠成品。

本发明将HA粗品通过膜分离技术分为2种不同分子量规格的HA成品，操作简单便捷，同时，相比传统的提取方式，提供了一种获得高分子量HA的新方法。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明作进一步描述。但需要说明的是，实施例并不构成对本发明要求保护范围的限制。

实施例1：

取分子量为210万Da的透明质酸钠粗品20g，溶于50L纯化水中，得到浓度为0.4g/L的透明质酸钠粗品溶液，用6mol/L的NaOH和HCL调节透明质酸钠粗品溶液的PH值为7后进行膜分离，膜分离过程分为2个阶段：先用0.3um的PVDF微滤卷式膜在0.15MPa透膜压力下截留浓缩高分子量透明质酸钠，得到浓度为2g/L的微滤浓缩液。再用截留分子量10000的PES超滤卷式膜在0.20MPa透膜压力下截留浓缩低分子量透明质酸钠，得到浓度为2g/L的超滤浓缩液。两种浓缩液分别用2倍体积的95％乙醇沉淀。沉淀物真空冷冻干燥得到两种不同分子量的透明质酸钠成品。采用黏度法(参见轻工行业标准QB/T4416-2012化妆品用原料透明质酸钠)测定分子量，其中微滤浓缩液的透明质酸钠成品分子量为520万Da，超滤浓缩液的透明质酸钠成品分子量为106万Da。

实施例2：