[发明专利]具有抗肿瘤活性的PD-L1亲和肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种活性肽，尤其是涉及一种具有抗肿瘤活性的PD-L1亲和肽，本发明还涉及该肽的应用。

背景技术

近年来，随着临床诊断、手术治疗、化疗和放疗等水平的不断提高，使得一部分肿瘤患者得到了早发现、早治疗，并且获得了较好的预后。但是，寻找新的治疗手段和治疗药物一直是全球范围内的研究热点。与传统的治疗方法相比，肿瘤免疫治疗能够激活或者诱导肿瘤患者建立起对肿瘤抗原的特异性免疫应答，清除原发的肿瘤细胞，并且建立免疫记忆，阻止肿瘤的复发和转移。在肿瘤免疫治疗的过程中，CD8 ⁺ 细胞毒 T 淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）是抗肿瘤免疫治疗的主要效应细胞，CD8⁺ CTL 需要通过 MHCI 类分子介导的细胞免疫应答过程而被激活。肿瘤抗原等内源性抗原被树突状细胞（DC） 等抗原提呈细胞（APC）加工处理后以 MHC/表位复合物的形式提呈至 APC 的表面，该复合物能被 T 细胞表面的T 细胞受体（TCR）识别，从而形成了激活 T 细胞的第一信号；与此同时，T 细胞和 APC 表面表达的多对共刺激分子相互作用产生了 T 细胞活化的第二信号。根据产生的效应不同，可将共刺激分子分为正性共刺激分子和负性共刺激分子。在正性共刺激分子中，最重要的是 CD28 和 ICOS 等分子；在负性共刺激分子中，最重要的是 CTLA-4（cytotoxic T lymphocyte antigen 4，CD152）和 PD-1（programmed death 1，CD279）等分子。在肿瘤免疫治疗过程中，负性共刺激分子主要介导免疫耐受和逃逸，而前人在肿瘤免疫治疗过程中遇到的最大挑战就是由于肿瘤免疫耐受和逃逸所导致的疗效不佳。因此，探讨通过抑制负性共刺激分子所介导的信号通路以打破机体已经建立的对肿瘤细胞的免疫耐受具有重要的理论意义和应用价值。PD-1 和它的配体 PD-L1 是 T 细胞活化过程中一对重要的负性共刺激分子，在诱导 T 细胞无能和免疫耐受维持方面起着非常重要的作用，并介导了肿瘤免疫耐受和逃逸。 

发明内容

本发明的目的在于利用PD-L1作为抗肿瘤靶点，提供一种具有抗肿瘤活性的PD-L1亲和肽，本发明还涉及该亲和肽在制备抗肿瘤药物中的应用。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的具有抗肿瘤活性的PD-L1亲和肽P1，是利用噬菌体展示肽库筛选得到的多肽，其氨基酸序列为：Phe-Pro-Asn-Trp-Ser-Leu-Arg-Pro-Met-Asn-Gln-Met；分子量为1520.7。

    本发明所述的具有抗肿瘤活性的PD-L1亲和肽可用来制备抗肿瘤药物，如可用来制备抗黑色素瘤（B16）和肝癌（H22）的药物。其制备方法是以该亲和肽P1作为活性成分，加上制药学上可接受的载体或/和添加剂，按常规方法制备成抗肿瘤药物制剂即可。

本发明的优点在于首次利用噬菌体展示肽库筛选技术，高通量的筛选出了针对 PD-L1靶点的具有抗肿瘤活性的亲和肽P1，通过小鼠体内荷瘤实验，证明了本发明亲和肽P1具有较好的抗肿瘤活性，能诱导小鼠体内肿瘤细胞凋亡，对肿瘤细胞具有极大的杀伤能力。本发明将为基于PD-L1 的药物研究和开发提供新的思路和理论基础。

附图说明

图1是ELISA鉴定P1噬菌体单克隆与PD-L1的亲和力结果图。

图2是P1肽质谱鉴定图。

图3是P1肽对荷H22瘤小鼠体重变化的影响结果图。

图4的P1肽对荷B16瘤小鼠体重变化的影响结果图。

图5的P1肽对荷H22瘤小鼠瘤体积变化的影响结果图。

图6的P1肽对荷B16瘤小鼠瘤体积变化的影响结果图。

图7是荷H22瘤小鼠移植瘤的瘤重图。

图8是荷B16瘤小鼠移植瘤的瘤重图。

具体实施方式

本发明所述的具有抗肿瘤活性的PD-L1亲和肽P1，是基于噬菌体展示肽库技术筛选得到的多肽，该多肽P1的氨基酸序列为：Phe-Pro-Asn-Trp-Ser-Leu-Arg-Pro-Met-Asn-Gln-Met；分子量为1520.7。

本发明所涉及的实验方法和结果如下：

1、ELISA鉴定P1噬菌体单克隆与PD-L1的亲和力