[发明专利]一种基于光谱技术的小球藻叶绿素含量与生物量同时检测的方法

权利要求书

1.一种基于光谱技术的小球藻叶绿素含量与生物量同时检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取小球藻反应液样本，采集小球藻反应液样本在波长439nm、534nm、696nm和1065nm下的光谱透射率值；测出该小球藻反应液样本的叶绿素a含量；

（2）以光谱透射率值为输入向量、测得的叶绿素a含量为输出向量，建立多元线性回归的模型，如式（1）：

Y=44.907x₁+76.406x₂-17.68x₃-32.692x₄+10.716   （1）

其中，y为小球藻的叶绿素a含量，单位为mg/g，x₁、x₂、x₃和x₄分别为反应液在波长439nm、534nm、696nm和1065nm下的平均光谱透射率值；

获取小球藻反应液样本的生物量，建立叶绿素a含量和生物量的相关性如式（2）：

y＝1620x+2.116×10⁵   （2）

其中，y为小球藻的叶绿素a含量，单位为mg/g，x为生物量，单位为mg/g；

（3）采集待测小球藻反应液在波长439nm、534nm、696nm和1065nm下的光谱透射率值，代入式（1）和式（2）中依次算出待测小球藻反应液的叶绿素含量和生物量。

2.根据权利要求1所述基于光谱技术的小球藻叶绿素含量与生物量同时检测的方法，其特征在于，

步骤（1）中将小球藻反应液样本划分为若干层，采集每层在波长439nm、534nm、696nm和1065nm下的光谱透射率值，然后求波长分别在439nm、534nm、696nm和1065nm下各层的光谱透射率平均值，以该光谱透射率平均值作为步骤（2）中的输入向量。

3.根据权利要求2所述基于光谱技术的小球藻叶绿素含量与生物量同时检测的方法，其特征在于，所述小球藻反应液每5～10cm厚为一层。

4.根据权利要求1所述基于光谱技术的小球藻叶绿素含量与生物量同时检测的方法，其特征在于，步骤（1）中小球藻反应液样本的叶绿素a含量采用热乙醇提取法测得。

5.根据权利要求4所述基于光谱技术的小球藻叶绿素含量与生物量同时检测的方法，其特征在于，热乙醇提取法具体步骤如下：

（1）取小球藻反应液离心，去上清液得沉淀；

（2）按与小球藻反应液体积比为1:1向沉淀中加入温度为80-85℃的95％乙醇制成悬浮液，80-85℃水浴保温2min，然后在45kw功率下避光超声15min，室温下避光处静置1h后5000r/min离心5min去沉淀得上清液；

（3）测上清液在649nm和665nm波长下的吸光度值，

计算公式如下：

C_a=13.70A₆₆₅－5.76A₆₄₉

其中，C_a为小球藻叶绿素a浓度，A₆₄₉、A₆₆₅分别为649nm与665nm处吸光度值；

y=Ca×VA×1000]]>

其中，y为叶绿素a含量，C_a为叶绿素a浓度，V为小球藻提取液样本总体积，A为取样小球藻鲜重。

6.根据权利要求1所述基于光谱技术的小球藻叶绿素含量与生物量同时检测的方法，其特征在于，小球藻反应液样本的生物量采用显微镜计数法测得。