[发明专利]铁皮石斛的茎尖组培繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于中药材种植技术领域，特别是一种铁皮石斛的茎尖组培繁殖方法。

背景技术

石斛为我国传统名贵中药材，我国历版药典均有记载。中药石斛的原植物为兰科（Orchidaceae）石斛属（Dendrobium Sw.）多年生草本植物。石斛属为兰科比较大的属之一，全球约有1000余种，我国石斛属植物共有74种2变种，其中商品流通的占50余种。其中以铁皮石斛最为珍贵，为所有石斛之极品。铁皮石斛为濒危物种，属国家二级重点保护植物，是名贵珍稀中药材。古代贵族称铁皮石斛为“紫楹仙姝”、“千年润”，民间又称“救命仙草”。正宗铁皮石斛呈铁绿色，气微，嚼之有黏性，味甘，少渣，长期食用无任何副作用。用铁皮石斛边炒边扭成螺旋状并烘干后称铁皮枫斗。

多年以来，商品石斛主要依靠野生药用石斛资源，随着药用石斛开发利用的不断深入和国内外需求量的逐年增加，我国野生药用石斛资源遭到了严重破坏，有些地区甚至面临枯竭。为了保护野生兰科植物资源，各国都出台了许多禁止采挖或销售野生兰科植物的法规和条例，1987年国务院出台的《野生药材资源保护管理条例》中，环草石斛、黄草石斛、金钗石斛、马鞭石斛和铁皮石斛被列为国家三级珍稀濒危保护植物。由此人们逐渐开始对铁皮石斛的野生植物进行家种栽培、高产栽培技术等加以实践。目前铁皮石斛的繁殖技术主要为种子繁殖、分株繁殖和扦插繁殖两种方式。

由于铁皮石斛种子难收集，种子发芽率低，而且种子繁殖，育苗时间长，大大增加了铁皮石斛的栽培成本，不利于铁皮石斛的人工大面积种植。所以在当前的人工栽培中，繁殖主要依靠分株繁殖和扦插繁殖，但该方法繁殖系数低，既不经济，又限制了铁皮石斛的产量潜力，不便栽植管理推广，因而扩大种植面积受到抑制。人们开始了人工繁殖，许多地方采用了组培繁殖方法以快速获得大量幼苗；目前繁殖速度很慢，无法满足实际需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种铁皮石斛的茎尖组培繁殖方法，以提高铁皮石斛的繁殖速度，实现铁皮石斛栽培的规范化和规模化发展；为实现这一目的，发明人经过长期试验，成功研究了繁殖铁皮石斛的各种组织培养基质配方和培养方法，对组织培养基质配方和生产工艺，以及铁皮石斛的特殊生长习性进行了大量研究和反复试验，获得了独创的培养基配方和培养方法。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是铁皮石斛的茎尖组培繁殖方法，包括引种灭菌、诱导培养、增殖培养、分化培养、壮苗和生根培养五大步骤，其特征在于具体方法如下。

⑴引种灭菌：选取健壮的野生铁皮石斛苗，从茎尖上切下长2.5～3.5cm的幼嫩茎尖，在流水下冲洗，放入1%洗洁精水溶液中浸泡5 分钟，然后用刷子轻轻刷洗，并用无菌水充分洗净；在超净工作台上将茎尖放置在75％的酒精中消毒30s后，再用0．1％的HgCl₂水溶液浸泡7～9min，然后用无菌水冲洗5～6次。

⑵诱导培养：将消毒处理后的幼嫩茎尖作为外植体接种在诱导培养基上，每瓶接种3～5株茎尖，在夜温22℃，日温24℃，相对湿度68%～70%，光照强度3000lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行圆球茎诱导培养，15～20天后，外植体开始萌动，茎尖膨大，切面及顶部组织形成疏松组织；继续培养15天后，转入到促形培养基中，每瓶培养2～4株茎尖，在夜温23℃，日温25℃，相对湿度70%～72%，光照强度3000lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长14小时的条件下进行圆球茎促形培养，25～30天后，切面及顶部膨大组织的表面逐渐形成凹凸不平的颗粒物，随着培养时间的延长，颗粒物长大形成直径1～2mm的圆球茎颗粒物。

⑶增殖培养：将诱导产生的生长状态良好的圆球茎转入到增殖培养基中，每瓶接种2～3颗，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度70%～72%，光照强度2000lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长14小时的条件下进行圆球茎增殖培养，在15～20天之内可观察到增殖培养基中又有新的疏松组织产生，在35～40天之内，可观察到圆球茎增殖了2～3倍。