[发明专利]来自具有储藏根的草本植物形成层的植物干细胞系及其分离方法

权利要求书

1.一种分离来自具有储藏根的草本植物形成层的细胞系的方法，所述方法包括下列步骤：

（a）得到具有储藏根的草本植物的储藏根组织，其中所述组织含形成层；

（b）处理所述组织，从而使形成层以外的一般组织失去分裂能力；

（c）通过在含有形成层分裂特异性激素的诱导培养基中培养得到的含有形成层的储藏根组织而诱导形成层细胞增殖；以及

（d）收集诱导的形成层细胞系。

2.权利要求1的方法，其中所述形成层分裂特异性激素是植物生长素。

3.权利要求1的方法，其中所述步骤（b）通过用产生渗透压的制剂处理所述组织来实施。

4.权利要求1的方法，其中所述诱导培养基含有吲哚-3-乙酸或吲哚-3-丁酸作为形成层分裂特异性激素。

5.权利要求4的方法，其中所述诱导培养基以0.1～5mg/L的浓度包含吲哚-3-乙酸或吲哚-3-丁酸。

6.权利要求1的方法，还包括将所述诱导的形成层细胞系转移到支持所述诱导的形成层细胞系持续增殖的维持培养基中，其中所述维持培养基包含植物生长素。

7.权利要求1的方法，还包括将所述诱导的形成层细胞系转移到支持所述诱导的形成层细胞系持续增殖的维持培养基中，其中所述维持培养基包含2,4-二氯苯氧乙酸、毒莠定或吲哚-3-丁酸中的一种或多种。

8.权利要求7的方法，其中所述维持培养基以1～5mg/L的浓度包含2,4-二氯苯氧乙酸、毒莠定或吲哚-3-丁酸。

9.权利要求1的方法，其中所述草本植物选自下组，包括人参、轮叶党参（Codonopsis lanceolata）、羌活（Ostericum koreanum KITAGAWA）、桔梗（Platycodon grandiflorum）、野葛（Pueraria thunbergiaana）、东北土当归（Aralia contonentalis Kitagawa）、防风（Ledebouriella seseloides）、朝鲜当归（Angelica gigas NAKAI）、胡萝卜、红薯、玛咖（Lepidium meyenii）和木薯。

10.权利要求9的方法，其中所述人参植物选自培养的人参和野山参。

11.权利要求1的方法，还包括通过冷冻保藏所述来自形成层的细胞系，其中所述来自形成层的细胞系可解冻和再培养。

12.细胞系，其具有下列特征：

（a）其不经过去分化过程；或

（b）其在培养过程中没有体细胞无性系变异。

13.权利要求12的细胞系，其还具有下列特征：

（a）其固有地未分化；

（b）其为同质的；和

（c）其以大量液泡为形态学特征。

14.权利要求12的细胞系，其还具有下列特征：

（i）其以单个细胞维持在悬浮培养物中；

（ii）与来自具有储藏根的草本植物形成层以外的其他组织的细胞系相比在生物反应器中对剪切应力具有较低的灵敏度；和

（iii）与来自具有储藏根的草本植物形成层以外的其他组织的细胞系相比具有较高的生长速度并可被稳定地培养。

15.权利要求12的细胞系，其中所述草本植物选自下组，包括人参、轮叶党参（Codonopsis lanceolata）、羌活（Ostericum koreanum KITAGAWA）、桔梗（Platycodon grandiflorum）、野葛（Pueraria thunbergiaana）、东北土当归（Aralia contonentalis Kitagawa）、防风（Ledebouriella seseloides）、朝鲜当归（Angelica gigas NAKAI）、胡萝卜、红薯、玛咖（Lepidium meyenii）和木薯。

16.一种保藏草本植物细胞系的方法，包括冷冻来自权利要求12～15中任一项的具有储藏根的草本植物形成层的细胞系。