[发明专利]一种利用响应曲面法优化菊芋秸秆绿原酸的提取方法

权利要求书

1.一种利用响应曲面法优化菊芋秸秆绿原酸的提取方法，包括以下步骤：

⑴样品溶液制备：

将菊芋秸秆洗净，在30~70℃温度下烘干12~72h后粉碎至60~100目，按20~30 mL/g料液比加入质量浓度为50%~70%的不同浓度的乙醇溶液，在50~70℃不同提取温度下按60~100min进行提取，提取后的溶液分别以5000转/min进行离心，20min后收集上清液，沉淀重复提取2~3次，合并得到对应于不同浓度乙醇溶液的提取液；所述对应于不同浓度乙醇溶液的提取液用其所对应浓度的乙醇溶液定容至相同体积；

⑵用HPLC法测定每个提取液中绿原酸含量：

①绿原酸标准溶液的制备：

精密称取绿原酸对照品10 mg，用质量浓度为60%乙醇溶解并定容于50 mL容量瓶，摇匀，得到0.2mg/mL储备液；再分别稀释0.2mg/mL储备液至0.1mg/mL、0.08mg/mL、0.06mg/mL、0.04mg/mL、0.02 mg/mL和0.01 mg/mL，用质量浓度为60%乙醇定容于25 mL容量瓶摇匀待用；

②色谱条件：

色谱柱：Dikma SynerSi 4u Fusion-RP 80R 250×4.6mm 4 micron；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：327 nm；流动相：0.2%磷酸：乙腈=82:18；进样量10μL；

③绿原酸含量标准曲线的制作：

以峰面积积分值为纵坐标Y，样品质量μg为横坐标X，绘制标准曲线，并建立回归方程为Y = 1503.3X + 183.62，相关性R²为0.9994；

⑶实验设计与统计分析

①单因素试验

依次改变提取溶剂乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比进行单因素试验，用HPLC法测定所得的菊芋秸秆绿原酸提取液中绿原酸的含量，并按下式计算绿原酸产率，每次处理重复三次：

绿原酸产率(%)=（提取液中绿原酸质量/菊芋秸秆原料质量）×100%；

②响应面法优化设计：

根据单因素试验结果，选取绿原酸提取效果影响较显著的提取溶剂乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比这4个因素，利用Design Expert 8.0软件根据Box-Behnken设计原则进行实验设计，以乙醇浓度A、提取时间B、提取温度C和料液比D为自变量，以绿原酸的产率为响应值y，建立多元二次回归方程：

Y = -43.53912 + 0.80192A+ 0.18447B+ 0.60434C+ 0.073179D- 8.14275 × 10^-4 AB- 2.51685 × 10^-3AC+ 4.65300 × 10^-4AD+ 5.51662 × 10^-4BC+ 7.40250 × 10^-4BD+ 1.05045 × 10^-3CD- 4.28194 × 10^-3A² - 9.03487 × 10^-4B² + 4.15504 × 10^-4C² - 3.81029 × 10^-3D²；

⑷实验结果分析与优化：

利用Design Expert 8.0软件根据多元二次回归方程进行绘图分析，得到回归方程的响应面及其等高线图。