[发明专利]猪肉质性状相关CDC16基因分子标记的克隆及其应用

说明书

技术领域

本发明属于家畜分子生物学技术领域，涉及一种包含如SEQ ID NO：1所示猪基因核苷酸的核酸分子。本发明还涉及如SEQ ID NO：1所示的多核苷酸序列中的单核苷酸多态性位点以及检测所述单核苷酸多态性位点的方法。

背景技术

猪肉是我国城乡居民动物性蛋白的主要来源，随着人们对肉品需要量的增加，对肉质质量的要求也相对提高。分子生物技术的发展，使人们可以在DNA水平寻找控制肉质性状的主基因或与其紧密连锁的分子标记，在育种过程中应用于标记辅助选择，以提高选择进程，更好地改善猪肉质性状，满足人们的需要，以获得更大的经济效益。

肉质定义最为广泛接受的是Hoffmarm的定义，即肉质应该考虑感官属性、营养价值、技术质量和食品安全。感官属性指外观（如色泽）、保水力、硬度，食用品质指嫩度、多汁性、风味与滋味、臭味、大理石纹，营养价值指脂肪含量、脂肪酸组成、蛋白质含量、其它营养含量，技术因素指系水力、脂肪硬度、组织分离、氧化稳定性，社会质量指动物福利、环境，食品安全指微生物卫生（无沙门氏菌、弯曲杆菌）、无残留(抗生素、重金属、杀虫剂)。影响猪肉质的因素很多，有遗传因素和非遗传因素，从遗传上对猪肉质性状进行评定和选育是改善猪肉品质的关键，肉质性状大多属于数量性状，由微效多基因控制，某些数量性状存在主基因效应，大多数属于QTL。许多肉质性状只能在动物屠宰后才能测定，所以常规选育只能寄予同胞或半同胞测验，这就势必加大选育成本，且遗传进展缓慢。只能肉质性状在动物屠宰时才能测定，需昂贵的同胞测验，因此，利用分子标记进行辅助选择（MAS)控制肉质性状是非常有意义的。

分子生物技术的发展和猪高密度基因图谱的构建，使育种工作者可在DNA水平上寻找影响肉质性状的主基因或与其紧连锁的分子标记，理论上这些主基因或分子标记一经确认，就可进行标记辅助选择育种。

分裂后期刺激复合体（The Anaphase-Promoting Complex,APC）是一种泛素的配体，是细胞有丝分裂中细胞周期素降解系统中的细胞周期调节的组成成分之一，而细胞周期素控制整个有丝分裂的过程。脊椎动物APC由8个亚基构成，它们分别是BimE（APC1）、CDC27（APC3）、CDC16（APC6）和CDC23（APC8）。据推算，人细胞分裂周期素蛋白16（Cell division cyclin16,CDC16）由619个氨基酸组成，与酵母CDC16的同源性大约是30%。通过免疫荧光技术,发现CDC16和CDC27在整个有丝分裂过程中，包括纺缍体出现时,聚集在中心体上。Kittler等以核糖核酸内切酶构建短的干扰RNA(shor interfering RNAs,esiRNAs)文库，发现CDC16基因与细胞分裂有关。

人CDC16基因DNA全长37777bp，包括18个外显子，17个内含子，5'-UTR长为186bp，3'-UTR232bp。小鼠CDC16基因DNA全长12576bp，包括7个显子，6个内含子，5'-UTR长为110bp，3'-UTR299bp。故人与小鼠CDC16基因结构明显不同。人CDC16基因位于13号染色体q34，该基因位于小鼠(Mus musculus)8号染色体A1.1-1.2。

猪CDC16基因定位于11号染色体（SSC11），猪CDC16蛋白质包括617个氨基酸，与人、小鼠和酵母的同源性分别为97.6%，95.3%，38.5，人与猪的CDC16蛋白质的疏水性分布也是非常相似的。

但是，目前国内外关于猪CDC16基因的相关研究很少。

发明内容

本发明的目的在于克隆猪肉质性状基因CDC16片段，寻找CDC16基因的突变位点以及作为猪肉质性状基因多态性的检测方法，为标记辅助育种提供一种有用的分子标记。

本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种猪肉质性状相关基因CDC16及其在猪标记辅助选择中的应用，为猪标记辅助选择提供有用的分子标记。

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：一种猪肉质性状相关基因CDC16在猪分子标记辅助选择中的应用，该猪肉质性状相关基因CDC16基因的DNA序列如SEQ ID NO：1所示的第570bp处有一个A/G的碱基突变，导致PCR-RFLP-Csp6I多态性。