[发明专利]黑曲霉种子液的制备方法以及发酵制备柠檬酸的方法

权利要求书

1.一种黑曲霉种子液的制备方法，该方法包括将黑曲霉接种到种子培养液中进行培养，其特征在于，该方法还包括，将黑曲霉接种到种子培养液中进行培养之前，将黑曲霉孢子进行预培养，所述预培养的条件包括：pH值为6.2-7.2。

2.根据权利要求1所述的黑曲霉种子液的制备方法，其中，所述预培养的pH值为6.5-7.2。

3.根据权利要求1或2所述的黑曲霉种子液的制备方法，其中，所述预培养的条件还包括，预培养的温度为30-35℃，预培养的时间为4-8小时。

4.根据权利要求1或2所述的黑曲霉种子液的制备方法，其中，所述预培养的条件还包括，在10-50rpm条件下进行摇床培养。

5.根据权利要求1或2所述的黑曲霉种子液的制备方法，其中，所述预培养的条件还包括，将黑曲霉孢子在糖液中进行预培养，所述糖液中的糖含量为2-5g/100mL。

6.根据权利要求1所述的黑曲霉种子液的制备方法，其中，该方法还包括，在预培养之前，将黑曲霉孢子在无菌水中进行分散得到孢子悬浮液。

7.根据权利要求6所述的黑曲霉种子液的制备方法，其中，将黑曲霉孢子在无菌水中进行分散得到孢子悬浮液的方法包括：将黑曲霉孢子分散到无菌水中，在300-1000rpm条件下，搅拌30-60min；然后在20000-40000频率下，超声处理20-40min。

8.根据权利要求1或6所述的黑曲霉种子液的制备方法，其中，所述黑曲霉孢子以黑曲霉麸曲的形式存在，将黑曲霉麸曲中的黑曲霉孢子在无菌水中进行分散得到孢子悬浮液的方法还包括：在将黑曲霉孢子分散于无菌水中之前，用无菌水对黑曲霉麸曲进行洗涤、过滤以除去黑曲霉麸曲，得到黑曲霉孢子。

9.根据权利要求6或7所述的黑曲霉种子液的制备方法，其中，所述孢子悬浮液中黑曲霉孢子的含量为4×10⁸-7×10⁸个孢子/ml。

10.根据权利要求1所述的黑曲霉种子液的制备方法，其中，将黑曲霉接种到种子培养液中进行培养的条件包括：糖含量为8-12重量%，培养的温度为33-40℃，起始pH值为5-6，通气量为0.1-0.5体积：（体积·分钟），时间为10-15小时。

11.一种发酵制备柠檬酸的方法，该方法包括在能够生成柠檬酸的条件下，将通过权利要求1-10中任意一项所述的黑曲霉种子液的制备方法得到的黑曲霉种子液接种至发酵培养基中进行发酵，得到发酵液。