[发明专利]一种利用甘草次酸发酵废液制备葡萄糖醛酸内酯的方法

权利要求书

1.一种利用甘草次酸发酵废液制备葡萄糖醛酸内酯的方法，其特征在于所述方法是将含高活性β-葡萄糖醛酸苷酶的微生物菌株，接种到含有甘草酸盐的发酵培养基中，进行发酵获得葡萄糖醛酸，再内酯化制备得到葡萄糖醛酸内酯，

所述的内酯化制备得到葡萄糖醛酸内酯的具体步骤为：

(1)发酵液过滤去除菌体和甘草次酸沉淀，流过预先处理过的OH型弱碱性阴离子交换树脂，流速为2～3BV/h交换吸附葡萄糖醛酸，所述的弱碱性阴离子交换树脂为D301型、D318型、D311型、D941型、D345型中的任一种；

(2)用浓度为0.5～1％的氨水洗脱获得葡萄糖醛酸洗脱液，向洗脱液加入无水乙醇在50℃～60℃减压浓缩至无可见水蒸馏出；

(3)向浓缩物中加入质量分数为40％的冰醋酸和3％的醋酸酐，温度保持在55℃～60℃进行内酯化反应2h；加入无水乙醇，析出葡萄糖醛酸内酯粗品；

(4)葡萄糖醛酸内酯粗品加入重量比为1∶4的80％(v/v)的乙醇水溶液重结晶，无水乙醇洗涤结晶，获得葡萄糖醛酸内酯精品，按中国药典中葡萄糖醛酸内酯的检测方法检测，含量为99％～102％。

2.如权利要求1所述的一种利用甘草次酸发酵废液制备葡萄糖醛酸内酯的方法，其特征在于所述的微生物菌株是野生型的，或者是遗传性状改变了的，为一种重组微生物或微生物的一种突变体，该菌株能表达高活性β-葡萄糖醛酸苷酶，在含有甘草酸的发酵培养基中可以将甘草酸盐水解产生甘草次酸沉淀和两分子葡萄糖醛酸，所述微生物选自曲霉属、糖酵母属、接合糖酵母属、毕赤氏酵母属、克鲁维氏酵母属、假丝酵母属、汉逊氏酵母属、德巴利氏酵母属、毛霉属、球拟酵母属、甲基细菌属、沙门氏菌属、芽孢杆菌属、链霉菌属和假单胞菌属的成员。

3.如权利要求1所述的一种利用甘草次酸发酵废液制备葡萄糖醛酸内酯的方法，其特征在于所述的微生物菌株可以是液体种子培养物，也可以是固体斜面培养物。

4.如权利要求1所述的一种利用甘草次酸发酵废液制备葡萄糖醛酸内酯的方法，其特征在于以甘草酸盐为碳源，其他碳源为非必须营养成分，发酵培养基中的甘草酸盐可以是甘草酸铵盐、甘草酸钾盐和甘草酸钠盐几种的一种或多种的混合物，发酵培养基成分还包括一定浓度的无机盐和一定浓度的氮源。

5.如权利要求4所述的一种利用甘草次酸发酵废液制备葡萄糖醛酸内酯的方法，其特征在于，所述的发酵培养基包括：2～4％甘草酸单铵盐，0.1～0.5％尿素，0.01～0.05％KH₂PO₄，0.01～0.025％MgSO₄，121℃灭菌15min后冷却到室温。

6.如权利要求1所述的一种利用甘草次酸发酵废液制备葡萄糖醛酸内酯的方法，其特征在于所述的发酵过程需要控制以下参数：温度25℃～37℃，搅拌转速200～220rpm/min，溶氧量为15％-20％，发酵时间4～6天。

7.如权利要求1所述的一种利用甘草次酸发酵废液制备葡萄糖醛酸内酯的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的弱碱性阴离子交换树脂为D301型。