[发明专利]一种血液和尿液中亚硝酸盐的快速检测方法

说明书

技术领域

    本发明属于体内药物检测技术领域，具体涉及一种血液和尿液中亚硝酸盐的快速检测方法。

背景技术

    一氧化氮（NO）的生化、生理、病理研究在世界生物和医学界广泛展开。作为相对稳定的NO代谢产物，亚硝酸盐（NO₂^-）在最近10年成为世界医学界的热点，亚硝酸盐是日常饮食和饮用水中常见的无机盐类。一般认为过量的摄入该类物质可能导致高铁血红蛋白血症，并在体内转变成致癌性的亚硝胺。通过测定尿液、血液中的NO₂^-的含量来反映体内NO含量和作为反应多项身体机能的重要指标。

目前亚硝酸盐检测最通用的方法是食品安全国家标准GB 5009.33- 2010，该标准第一法中采用离子色谱法检测各类食品中的亚硝酸盐和硝酸盐，包括水果、蔬菜、鱼、肉、奶等各种类型的样品。同时，NO₂^-的测定还有荧光光度法、高效液相色谱法、可见分光光度法等。血液或尿液中NO₂^-的检测通常用Griess检测试剂盒，然而血液或尿液中NO₂^-含量低，基体复杂，常常干扰实验结果，难以达到检测需求。研究小组之前利用高效液相色谱(HPLC)对血液尿液及组织中硝酸盐与亚硝酸盐检测进行过较深入的研究，已经取得了不错的效果，申请了发明专利（201310129291.X），进一步研究发现，将亚硝酸盐与Griess试剂反应，经浊点萃取（CPE）进行分离、富集，直接目视比色，可进行血液尿液中亚硝酸盐高灵敏、简单快速检测，该技术不需仪器设备，可现场检测，具有更明显的优势。建立一种灵敏度高、特异性强、简单快速尿液、血液中的亚硝酸盐测定方法，对临床医学中涉及一氧化氮信号因子的诸多疾病的诊断和治疗有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种简单快速、灵敏度、能现场检测、尿液中亚硝酸盐定性、半定量的方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

除非另有说明，本发明所采用的百分数均为重量百分数。

一种血液和尿液中亚硝酸盐的检测方法，包括以下步骤：

（1）亚硝酸盐标准色阶制作：取浓度为10.0μg/mL 的NO₂^-   标准溶液0.01、0.05、0.10、0.30、0.70、1.0mL于刻度离心管中，用蒸馏水稀释至5mL，加入GriessA试剂250μL，混合均匀；1min后加入GriessB试剂250μL，混合均匀，加入非离子表面活性剂0.5mL，盐0.1～0.5g，涡旋混合1min，离心分相，在离心管底出现红色由浅至深的微滴色阶溶液；

（2）样品检测： 

尿液的检测：取10mL尿液，硫酸锌0.4～1.0g，加入脱色剂0.5～1.0g，混合均匀，离心脱色，滤纸过滤除去脱色剂；取5mL脱色后的尿液，加入GriessA试剂250μL，混合均匀；1min后加入GriessB试剂250μL，混合均匀，放置5min后，加入非离子表面活性剂0.5mL，盐0.1～0.5g，涡旋混合1min，离心分相，将管底形成的微滴的颜色与步骤（1）标准色阶比较，判断其含量； 

血液的检测：取5 mL新鲜血液，放入离心机中离心，取上清液，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液0.2mL和硫酸锌0.2g,混合均匀，加入乙腈1mL，离心分离，取上清液2mL于10mL离心管中用蒸馏水定容至5mL,加入GriessA试剂250μL，混合均匀；1min后加入GriessB试剂250μL，混合均匀，放置5min, 加入非离子表面活性剂0.5mL，盐0.1～0.5g，涡旋混合1min，离心分相，将管底形成的微滴的颜色与步骤（1）标准色阶比较，判断其含量；

其中，步骤（1）（2）中所述的GriessA试剂为50mg对氨基苯磺酸溶于10%醋酸1.5mL和去离子水3mL；GriessB试剂为4mg N-1-萘乙二胺盐酸盐溶于10%醋酸4mL；

所述脱色剂为：活性炭、分子筛、硅酸镁、氧化钙、滑石粉中之一种；

所述非离子表面活性剂包括Triton X-114、Triton X-110、壬基酚聚氧乙烯醚类NP-7和NP-9、Tergitol TMN-6中之一种；

所述盐包括氯化钠、硫酸钠、硫酸铵、氯化铵中之一种。

所述的离心条件为离心时间5～15min，离心速率3000～10000r／min。