[发明专利]一种鸡球虫多价重组蛋白亚单位疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物兽药技术领域，涉及一种鸡球虫多价重组蛋白亚单位疫苗。

背景技术

鸡球虫病是一种严重危害养鸡业生产发展的寄生原虫病，每年因此而导致的经济损失高达20亿英镑以上。随着鸡球虫抗药性和药物残留问题的日趋严重，人们期待用更理想的方法代替抗球虫药的使用。然而球虫活疫苗的成功研制和应用提供了一种可代替药物控制鸡球虫病的技术手段，但却存在成本高、难保存、易散毒及具致病威胁等缺点，其中最大的缺点是易散毒，对鸡群具有致病性，严重限制了鸡球虫活疫苗的应用。因此随着分子生物学和现代生物技术的发展，重组亚单位疫苗以其独特的优势显示出在未来畜禽疫病控制中的诱人前景，该疫苗只含有病原体的一种或几种产生保护性免疫应答所必需的免疫原蛋白成分，在鸡体内不能在体内复制，不会散毒，对鸡没有致病性，用这些疫苗接种动物，都可使之在获得抗性同时而免受球虫感染，克服了传统活疫苗易散毒、具有致病性等缺点。

国内外一些学者已经构建了一些鸡球虫重组亚单位疫苗，如但大多只具有单一的抗原成分，关于鸡球虫多价重组蛋白亚单位疫苗的研究未见报道。能够感染鸡的球虫公认的有7种，危害较大的有4种，分别是柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）、毒害艾美耳球虫（E.necatrix）、巨型艾美耳球虫（E.maxima）和堆型艾美耳球虫（E.acervulina），在临床上，这4种球虫多为混合感染，给养鸡业带来了巨大的危害。因此，研制能够同时抵抗4种球虫混合感染的多价重组蛋白亚单位疫苗显得尤为重要。

本实验室分别用E.tenella抗原基因TA4、E.necatrix抗原基因NA4、E.maxima抗原基因Em8和E.acervulina抗原基因LDH构建了4种球虫的单价DNA疫苗，动物免疫保护试验结果发现用所述抗原基因构建的重组表达质粒能够为鸡提供针对上述4种鸡球虫的有效免疫保护。但是相应的原核表达的重组蛋白是否也能提供有效的免疫保护却是未知的，需要用大量的实验来摸索验证的。因为DNA疫苗免疫不同于原核表达重组蛋白免疫，DNA疫苗免疫是抗原基因在机体进行真核表达，表达的蛋白更有可能形成正确的结构，具备糖基化、乙酰化等修饰，更可能具有天然功能，其在体内诱导免疫反应的过程，接近于自然感染的过程，既能够诱导体液免疫反应，又能够诱导细胞免疫反应。原核表达重组蛋白免疫是用体外原核表达的的重组蛋白进行免疫，重组蛋白缺乏糖基化、乙酰化等修饰，能否能提供有效的免疫保护需要大量的实验来验证。重组蛋白疫苗不能在体内复制，对宿主没有致病风险，而且易于在体外大量表达，具有很好的运用前景。本发明将E.tenella的重组蛋白pET28b(+)-TA4，E.necatrix的重组蛋白pET28a(+)-NA4，E.acervulina的重组蛋白pET28a(+)-LDH和E.maxima的重组蛋白pET32a(+)-Em8等质量混合进行动物保护试验，检测其对临床上危害最为严重的4种球虫的抵抗力，以期为该疫苗在临床上的应用提供参考。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够预防多种鸡球虫混合感染的多价重组蛋白亚单位疫苗。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种鸡艾美耳球虫多价重组蛋白亚单位疫苗，该疫苗包含4种鸡球虫重组蛋白：TA4（E.tenella），NA4（E.necatrix），LDH（E.acervulina）和Em8（E.maxima），所述的4种重组蛋白TA4、NA4、LDH和Em8依次具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。

本发明所述的鸡艾美耳球虫多价重组蛋白亚单位疫苗，优选由上述4种鸡球虫重组蛋白成分按照1:1:1:1的质量比例混合而成。

本发明所述的鸡艾美耳球虫多价重组蛋白亚单位疫苗在制备预防鸡球虫病的药物制剂中的应用。

生产本发明鸡球虫多价重组蛋白亚单位疫苗的方法，简而言之，其技术路线如下：