[发明专利]一种油桐叶片再生植株的方法

说明书

技术领域

本发明属于油桐的快繁技术领域，具体涉及一种油桐叶片再生植株的方法。 

背景技术

油桐(Vernicia fordii)属大戟科(euphorbiaceae)油桐属(Vernicia)落叶乔木，是中国特有的经济树种，与油茶、核桃、乌桕并称我国四大木本油料树种。油桐种子含油率达50%-70%，其中约94%为不饱和脂肪酸，从油桐中提炼的桐油是一种可替代传统柴油的优质干性油，在原油日趋减少和环保压力加重的今天，油桐成为了优良的生物能源树种，桐油是一种抗冷热、防潮、防锈、防腐蚀的优良涂料，也是合成新型复合材料的基本原料，具有广泛的用途。近年来，随着能源缺乏和桐油加工综合利用技术的提高，发展油桐产业已迫在眉睫，油桐有可能成为替代生物能源的最有潜力的树种，油桐的种质资源保护、良种选育以及高产栽培技术受到了关注。 

油桐种苗繁育主要采用播种育苗及嫁接育苗，播种育苗后代分化严重，难以保持母本的优良性状，产量高低不一。嫁接育苗虽然能保持母本的优良性状，但是成活率较低以及受良种穗条的限制等不能大规模育苗。组织培养是快速繁殖优良植物品种的一条重要途径。目前，关于油桐组织培养的研究很少，张珊珊等通过对油桐种胚培养建立了油桐种胚无菌苗，李建安等人通过油桐叶片诱导了愈伤组织，但并未诱导出不定芽。关于木本植物通过叶片培育再生植株一直是林业科研人员在组培上的一个难题，油桐通过叶片直接诱导出不定芽再生植株的方式迄今尚未报道。本发明主要通过油桐叶片直接诱导不定芽，继代培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养及炼苗移栽等过程，不仅为快速繁殖优良油桐植株提供了一条新的途径，而且为以后在基因工程领域通过叶盘法转基因来改良油桐的抗性、提高油桐产量及油质质量等性状打下坚实的基础。 

发明内容

本发明的目的是针对目前油桐采用叶盘法直接诱导不定芽再生植株技术领域中的缺失，提供一种油桐叶片再生植株的方法；该方法利用油桐无菌苗叶片直接诱导出不定芽，其诱导率高，不定芽继代增殖系数高，壮苗效果好，生根率高。 

本发明的目的是通过以下方式实现的。 

一种油桐叶片再生植株的方法，包括以下步骤： 

将油桐无菌苗叶片，在无菌条件下切成面积为0.5-1cm²的叶盘，接种到1/2MS+1.0-3.0mg/L6-BA+0.05-0.1mg/L IAA+0.05-0.1mg/L IBA的培养基中诱导不定芽，暗培养3-5天后，在光照条件下培养20-30天，培养温度为26士1℃，光照强度为1800-2000lx，光照时间14-16h/d；然后经过继代、增殖、壮苗和生根培养获得完整植株；最后进行炼苗、移栽。 

上述方法中继代培养的具体过程如下：将叶盘诱导的不定芽切下接种到1/2MS+1.0-3.0mg/L6-BA+0.05-0.1mg/L IBA的培养基中进行不定芽的继代培养，暗培养1-3天后，在光照条件下培养15-25天；培养温度为26士1℃，光照强度为1800-2000lx，光照时间14-16h/d。 

上述方法中增殖培养的具体过程如下：将继代培养得到的不定芽切下接种到MS+2.0-3.0mg/L6-BA+0.05-0.1mg/L IBA的培养基中进行不定芽的增殖培养，暗培养1-3天后，在光照条件下培养25-30天；培养温度为26士1℃，光照强度为1800-2000lx，光照时间14-16h/d。 

上述方法中壮苗培养的具体过程如下：将增殖培养得到的芽转接到MS+0.3-1.0mg/L6-BA+0.5-1.0mg/L NAA的培养基中进行壮苗培养，暗培养1-3天后，在光照条件下培养20-25天；培养温度为26士1℃，光照强度为1800-2000lx，光照时间14-16h/d。 

上述方法中生根培养的具体过程如下：将增殖培养获得2-4cm的苗接到1/2MS+0.05-0.3mg/LIBA的培养基中进行生根培养；培养温度为26士1℃；暗培养5-7天，再转到光照下培养5-8天生根，光照强度为1800-2000lx，光照时间14-16h/d。 

上述方法中炼苗、移栽的具体过程如下： 

将生根后的苗先在室内进行移栽前炼苗，3-5天后从培养瓶中取出，洗净根部培养基，移栽到营养杯中，基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石=2:1:1，组培苗移栽后保持湿度不低于80%，覆盖薄膜并每天喷水1-2次，两周后即可逐步进行正常管理。 

上述方法中：