[发明专利]制备卵囊的改进方法

说明书

本申请是申请日为2002年8月29日，申请号为200810149286.4，发明名称为“制备卵囊的改进方法”的发明专利申请的分案申请。

相关申请资料

本申请要求2001年8月30日提出的美国临时申请号60/316310的权益，其全部内容通过引用结合到本说明书中。

技术领域

本发明提供制备来源于原生动物的卵囊的方法和组合物；特别地，本发明提供制备艾美虫(Eimeria)卵囊的方法和组合物。

背景技术

家禽球虫病是艾美虫属原生动物寄生虫所致的疾病。艾美虫类的卵囊普遍存在于环境并且在家禽垃圾中持续存活多个月。食入卵囊能以种特异性方式导致消化道多个部位的感染。这些生物体在消化道内的增殖超过数日，结果使其下一代卵囊排泄于粪便中。重复周期感染导致免疫，并且当家禽接受早期感染且家禽之间的剂量均一，经过几个周期接触后可以形成相当巩固的免疫力。

相反，当禽类未以均一的方式接受感染，可能引起从未感染过的禽类受到突然、严重感染的情形，导致饮食转化能力以及体重增加的降低，以及较高的二次感染的危险。目前，家禽工业中用于控制球虫病的最常见方法不是疫苗接种，而是在食物中给予抗球虫药。接种率低常常是由于通过操作便利的饮食或饮水或通过孵化场喷洒接种的给药均一性不可靠，这些是传统的给药途径和时间。对改善孵化场给药期间的给药均一性的关注正在逐渐增加。

近来，已建立的卵内接种技术适用于以活卵为基础的球虫疫苗给药(WO96/40234和WO96/40233；Pfizer，Inc.)。这种卵内给药途径提供了一种对仍在禽卵中的各个胚胎给予均一剂量的疫苗的便捷方法。卵内给予禽疫苗现在应用于美国每年生产的90亿只童子鸡中的约85％，以及百分比渐增的在美国之外每年生产210亿童子鸡(例见，美国专利号4458630)。因此，活的、卵内给药的球虫疫苗的潜在市场显著大于孵化后给予球虫疫苗的当今市场。

采用于球虫活疫苗的卵囊来源于原先严重富含污染微生物的鸡粪。通常，管理单位要求卵内给药疫苗应当表明基本不存在污染微生物。为最彻底地保证终产品中的生物负荷水平最小，在卵囊制备过程的各步骤中采用有效控制微生物污染水平的组合物和方法是有益的，包括收集和孢子形成步骤以及灭菌步骤。

目前疫苗制备中制备卵囊的方法的缺陷在于经常使用对设备有害或腐蚀的材料。

因此，本领域内需要一种改进的由原生动物制备卵囊的方法，尤其是用于制备疫苗。

发明内容

本发明涉及改进的制备原生动物卵囊(例如，艾美虫)的方法和组合物，例如用于制备疫苗。尤其在家禽疫苗方面，本发明适合于制备孵化后或卵内使用的疫苗。同样，该疫苗可以用于童子鸡、蛋鸡、种鸡、火鸡、小马和/或家禽产业。

相应地，第一个方面，本发明提供一种用于制备卵囊的组合物，其包括过氧化合物和有机酸，所述组合物具酸性pH值。该组合物可以用于原生动物卵囊的收集、孢子形成和/或灭菌。

由此，另一方面，本发明提供一种收集动物粪便中的原生动物卵囊的方法，其包括步骤：(a)提供原生动物感染的动物，其中动物在其粪便中排泄源自原生动物的卵囊，和(b)使来源于感染动物的含卵囊的粪便与包括过氧化合物和有机酸的组合物接触。

在特定的上述实施方案中，从组合物中撤除或者过氧化合物或者有机酸，特别是当被用作收集介质的时候。

另一方面，本发明提供一种使原生动物卵囊形成孢子的方法，其包括步骤：(a)提供一种包括原生动物卵囊的组合物，和(b)在适合孢子形成的条件下使卵囊在包括过氧化合物和有机酸的组合物中持续一定时间形成孢子。

再一方面，本发明提供一种使原生动物卵囊消毒的方法，其包括：(a)提供一种包括原生动物卵囊的制品，和(b)在足以达到对所述制品的需要消毒水平的条件下在包括过氧化合物和有机酸的组合物中使卵囊消毒一定时间。

又一方面，本发明提供一种用于纯化原生动物卵囊的浮选介质，其包括高密度、非离子溶液和聚阳离子。在另一种实施方案中，本发明提供一种用于纯化原生动物卵囊的浮选介质，其包括高密度、非离子溶液和油。

本发明也提供一种通过浮选而纯化原生动物卵囊的方法，其步骤包括：(a)在上述浮选介质和大量原生动物卵囊之间形成悬浮液，(b)让悬浮液分层，和(c)从分层的悬浮液中收获原生动物卵囊。

本发明上述方面的一种特定实施方案中，原生动物包括艾美虫属的物种并且动物对象为禽类。