[发明专利]一种沙门氏菌LAMP引物组和试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全的分子生物学检测方法领域，特别涉及一种沙门氏菌（salmonella）LAMP引物组和试剂盒及检测方法。

背景技术

沙门氏菌是一种常见的人兽共患病原菌，不仅引起各种动物疾病，而且与人类多种疾病有关，其中，由沙门氏菌引起的食物中毒病例在食物中毒中居于前列。

沙门氏菌(salmonella)属的成员可感染多种动物和人,大部分具有很强的致病性。沙门氏菌感染因其对人类、畜禽饲养业造成的危害,而被广泛重视。据世界卫生组织报告，世界各国沙门氏菌食物污染日益增多，造成巨大经济损失，严重威胁着人们的身体健康和生命安全，因而沙门氏菌已被列为食品中致病菌检测的一个重要对象和一项重要指标，社会各检疫部门也加大了对沙门氏菌的防制及监控力度。在我国，由沙门氏菌引起的食物中毒屡居首位。据资料统计，在我国细菌性食物中毒中，70%～80%是由沙门氏菌引起，而在引起沙门氏菌中毒的食品中，90%以上是肉类等动物性产品。

为了寻求快速、准确、简便、微量的检验方法,国内外学者进行了大量的研究,从以传统方法为基础发展到以免疫学为基础的或以分子生物学为基础的快速检测方法,并在实践检验中不断取得新进展。

目前，包括我国在内的许多国家对沙门氏菌的检测普遍采用传统培养方法，报告检验结果大致需4～5d，加之检测方法繁琐、费时费力，不仅成为检验部门的一项沉重负担，而且越来越不能满足日益发展的国际贸易的需要。20世纪50年代以来，为了寻求快速、准确、简便、微量的检测方法，国内外学者进行了大量的研究，从以传统方法为基础发展到以免疫学为基础的或以分子生物学为基础的快速检测方法，并在实践检验中不断取得新进展。

以抗体为基础的ELISA方法和免疫荧光标记方法将检测时间缩短了一半，灵敏性高和但特异性差；以核酸为基础的PCR技术由于灵敏、简单、快速和特异已被广泛用于沙门氏菌检测，但检测样品复杂，对假阴性的检测结果没有控制，存在漏检的可能。因沙门氏菌危害严重，漏检造成的危害无法估量。为减少漏检造成概率，史贤明教授等申请一项添有扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法（专利号：200710040001.9），通过内标的检测结果判断是否发生假阴性。但PCR扩增需要昂贵的仪器，很多基层检测单位不具备相应检测条件。因此，建立一种快速、准确、高通量且对仪器要求不高的的检测试剂盒及检测方法成为目前急需解决的问题。

沙门氏菌作为食品卫生检验一项重要目的菌有着重要的意义，提高沙门氏菌检出率,缩短检测时间，防止因样品复杂性、抑制因子多等原因等抑制反应而发生漏检的现象发生，对保证食品的安全性和消费者的身体健康具有重要的意义。

发明内容

为克服上述现有技术的缺点和不足，本发明的首要目的在于提供一种沙门氏菌LAMP引物组，包含检测引物组及内标引物组。

本发明的另一目的在于提供含有上述引物组的沙门氏菌LAMP检测试剂盒。该试剂盒可根据内标检测结果判断检测结果是否为假阴性。

本发明的再一目的在于提供运用上述检测试剂盒的沙门氏菌LAMP检测方法。可根据检测内标引物组是否有扩增来判断是否有假阴性检测结果。为现有技术无法判断检测结果是否是假阴性结果的情况，提供一种新的LAMP检测方法。不仅降低检测成本，摆脱对昂贵仪器的依赖，同时提高检测的准确性。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种沙门氏菌LAMP引物组，包含检测引物组及内标引物组。可根据检测引物组和内标引物组是否有扩增来判断是否有假阴性沙门氏菌检测结果。

检测引物组包括一对外引物、一对内引物和一对环引物，其核苷酸序列分别如下所示：

SafimI-F3：CACTAAATCCGCCGATCAA；

SafimI-B3：CAACGGTGAGGAGGTATTATC；

SafimI-FIP：TTCGGATCGCAGTCATTCAGGCGATTGGTGATACGACCG；

SafimI-BIP：GGTCAGGCAGATAACACCAACATTGCGGTGGTGCTATTATC；

SafimI-LF：TGGTGAAAGGCACCTGTG；

SafimI-LB：ATTTGCTGGCTGTCTCCTC。

内标引物组包括一对外引物、一对内引物和一对环引物，其核苷酸序列分别如下所示：

SainvA-F3：CGAAGCGTACTGGAAAGG；

SainvA-B3：ATCACCAATGGTCAGCATG；