[发明专利]一种罗素伐他汀中间体的制备方法

权利要求书

1.一种(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的制备方法，该方法以(R)-4-氰基-3-羟基丁酸甲酯为底物，使其在酶的作用下反应生成所述(R)-3-羟基戊二酸单甲酯，其特征在于：所述的酶为重组腈水解酶，该重组腈水解酶的制备方法为：将含有腈水解酶基因的重组大肠杆菌单菌落接种到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基中，于35～40℃下活化8～12小时，将活化后得到的培养物接种到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基中，于35～40℃下振荡培养，培养至OD₆₀₀值达到0.6～0.8时，加入诱导剂，于25～33℃下继续培养8～12小时，离心，收集沉淀物，加入磷酸盐缓冲液得悬浮液，将悬浮液置于冰水浴中超声破碎8～12分钟，再离心，将上清液预冻至温度降至-10℃～-25℃，然后冷冻干燥24～48小时，即得冻干的粉状重组腈水解酶；所述的反应在pH为7.0～9.0的水相缓冲液中以及温度25℃～35℃下进行。

2.根据权利要求1所述的(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的制备方法，其特征在于：所述的诱导剂为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷。

3.根据权利要求1所述的(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的制备方法，其特征在于：所述的水相缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tri-HCl缓冲液。

4.根据权利要求1所述的(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的制备方法，其特征在于：重组腈水解酶与底物的投料质量比为0.01～0.1:1，反应起始时，底物浓度为0.8～1.5mol/L。

5.根据权利要求4所述的(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的制备方法，其特征在于：重组腈水解酶与底物的投料质量比为0.02～0.05:1，反应起始时，底物浓度为1.0～1.5mol/L。

6.根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的制备方法，其特征在于：所述方法具体实施如下：将所述重组腈水解酶加入到水相缓冲液中，然后采用恒流泵流加底物，待底物加毕，使反应体系在温度25℃～35℃下以及搅拌下反应，至底物转化率大于等于99.0%，终止反应。

7.根据权利要求6所述的(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的制备方法，其特征在于：终止反应后，用盐酸调节体系至酸性，然后用硅藻土过滤，用乙酸乙酯冲洗滤渣；滤液用乙酸乙酯萃取，合并有机相；有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后得到黄褐色油状物即为(R)-3-羟基戊二酸单甲酯。

8.一种羟基被保护的(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的制备方法，所述羟基被保护的(R)-3-羟基戊二酸单甲酯为(R)-3-叔丁基二甲基硅氧基戊二酸单甲酯，其特征在于：所述制备方法包括如下步骤：

（1）按照权利要求1至7中任一项权利要求所述的方法制备得到(R)-3-羟基戊二酸单甲酯；

（2）使(R)-3-羟基戊二酸单甲酯与叔丁基二甲基氯硅烷在有机溶剂中，催化剂和有机碱缚酸剂存在下，于常温下搅拌反应，得到3-叔丁基二甲基硅氧基-戊二酸甲酯叔丁基二甲基硅酯，其中，(R)-3-羟基戊二酸单甲酯、叔丁基二甲基氯硅烷以及有机碱缚酸剂的投料摩尔比为0.4～0.5:1:1.05～1.2。

（3）使3-叔丁基二甲基硅氧基-戊二酸甲酯叔丁基二甲基硅酯在碳酸钾存在下、溶剂中发生水解反应生成所述(R)-3-叔丁基二甲基硅氧基戊二酸单甲酯。

9.根据权利要求8所述的羟基被保护的(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述催化剂为4-二甲氨基吡啶，其与(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的投料摩尔比为0.002～0.01:1，所述有机碱缚酸剂为选自咪唑、N,N-二异丙基乙胺、吡啶及三乙胺中的一种或多种的组合。

10.根据权利要求8或9所述的羟基被保护的(R)-3-羟基戊二酸单甲酯的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，采用甲醇、四氢呋喃以及水的组合作为溶剂，所述碳酸钾与3-叔丁基二甲基硅氧基-戊二酸甲酯叔丁基二甲基硅酯的投料摩尔比为4.5～5:1。