[发明专利]一种黑鲍菇液体菌种制备及高产栽培的方法

说明书

技术领域

一种黑鲍菇液体菌种制备及高产栽培的方法，属于食用菌栽培学领域。 

背景技术

在黑鲍菇[Pleurotus ostreatus(Jacg.exFr.)]，又称黑平菇、灰平菇、北风菌、元菇、边脚菇、鲍鱼菇等，在生物学分类中属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、侧耳科、侧耳属。其子实体菌盖呈贝壳形或扇形等，菌盖表面灰黑光亮，肉肥质嫩、味道鲜美、营养丰富。其总糖含量高达44.4％，并含有各种维生素和人体必需的氨基酸及微量元素，经常食用能降低血压和胆固醇，预防动脉硬化，治疗植物性神经紊乱等，被国内外称为功能食品、保健食品。因其子实体有浓鲜的鲍鱼味，故称之“鲍鱼菇”。目前关于液体菌种生产的研究主要集中在金针菇、竹荪、羊肚菌等人工栽培较困难或产量较低的食用菌的配方筛选、菌种筛选、规模化深层发酵工艺等，并只取得了一定的进展，而对比较适合目前菌种厂生产规模的液体摇瓶培养菌种的生理及应用技术的研究报道很少。为了充分发挥液体菌种在黑鲍菇生产中的优势，本课题对液体培养黑鲍菇种进行了比较系统的研究。另外，我们在栽培方式和管理措施上加以改进和创新，经过几年探索和反复试验终于研究出了液体摇瓶培养和发酵罐培养黑鲍菇菌种的生产应用的新途径。 

发明内容

(一)液体种营养物质和培养基筛选的研究 

1材料 

11供试菌种黑鲍菇PL-AD₂₈，由烟台师范学院食用真菌研究所提供。 

1.2基础培养基蔗糖1％，蛋白胨0.5％，KH₂PO₄0.05％，MgSO₄0.05％，VB₁10mg/L。 

1.3摇瓶培养基可溶性淀粉5％、蔗糖1％、MgSO₄0.15％、KH₂PO₄0.3％、酵母膏(粉)0.1％，pH值自然。 

2方法 

2.1一级摇瓶种的制备将刚培养好的试管斜面菌种在无菌的条件下挑取黄豆粒大小4-6块接入500ml(装液量200ml)三角烧瓶中，让菌丝面朝上漂浮于液面上，置于25℃恒温箱中静止培养48h，然后于25℃，180r/min旋转式摇床震荡培养5～6d. 

2.2二级摇瓶种的制备在500ml(装液量200ml)三角烧瓶中接入一级摇瓶种，接种量为 10％，置于25℃、180r/min旋转式摇床振荡培养5d，种液澄清、淡黄，取出种瓶静放，分布均匀，终止发酵。然后测其生物量、菌球密度和菌球直径，进行方差分析。 

2.3生物量测定发酵终止后，将二级摇瓶中的培养液用15×15cm3～4层纱布过滤，再用水冲洗几次后，于60℃烘干箱烘干至恒重，测其生物量。 

2.4菌球密度的测定将菌液置于200ml量筒中静止5min，测菌球占菌液体积的百分比。 

2.5菌球直径的测定随机取菌球排成一条5cm直线，数出5cm直线内的菌球数，然后用菌球数除以5cm，即得菌球的平均直径。 

2.6最适碳源的筛选实验将基础培养基中的碳源分别用1％的蔗糖、葡萄糖、红糖、麦芽糖、果糖、白糖作为碳源，以无碳源基础培养基作为对照组，各碳源重复3次，培养条件同摇瓶种。发酵终止，测定各种碳源对其生物量的影响。 

2.7最适氮源的筛选实验将基础培养基中的氮源分别用0.1％的酵母膏(粉)、蛋白胨、牛肉膏、NH₄CL、NaNO₃、(NH₄)₂CO₃作为氮源，以无氮源基础培养基为对照，各重复3次，培养条件同摇瓶种，发酵终止，测定各种氮源对其生物量的影响。 

2.8最适无机盐的筛选实验将基础培养基中的无机盐，分别用0.2％的KH₂PO₄、K₂HPO₄、MgSO₄、ZnSO₄、FeSO₄、CaCO₃作为无机盐，以无机盐基础培养基为对照，各重复3次，培养条件同上，发酵终止，测定各种无机盐对其生物量的影响。