[发明专利]伯克霍尔德氏菌LH-ZY01及其在抑制立枯丝核菌中的应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及伯克霍尔德氏菌LH-ZY01（burkholderia sp.），还涉及该菌种及其在抑制立枯丝核菌中的应用。 

背景技术

立枯丝核菌是多种作物的常见致病菌，其染病的范围很广，不仅涉及各种常见的蔬菜，如菠菜、油菜、番茄、小白菜等；各种常见的粮食作物如水稻、小麦等；还有苹果、橘子、甘蔗、甜橙等水果。 

此外，立枯丝核菌在土壤中也比较顽固，一般可在土壤中存活3年之久，是棉花、水稻及多种蔬菜连坐障碍的主要原因，每年有成千上万公顷的设施农业土壤由于连作障碍而不断被放弃，对人力物力和财力等造成了极大的浪费，极大的影响了广大农民的经济收益。农民们只好用井冈霉素、立佳欣等药剂对这些土壤进行处理，在增加农民生产成本的同时污染了土壤环境，而且对农产品的品质造成了一定的影响。 

在农业环境中伯克霍尔德氏菌广泛存在于土壤、水及植物根围，它不仅在植物根围分布丰富，还定殖于根系内部，其中有的可以固定大气中的氮气，促进作物生长，提高作物产量；有的具有解磷解钾的作用，在改良土壤作用的同时也可为作物提供磷钾等元素。同时该菌还报道为优良的农业生物防治剂，目前已有作为生物农药和生物肥料应用于农业生产的专利。    

如申请号为201110423432.X、201210026711.7、200610022484.5三个专利涉及伯克霍尔德氏菌属的菌株在生物防治中的应用。这类菌株由于不是芽孢杆菌，直接做成可湿性粉剂具有稳定性差、存活期短的局限，从而大大限制了该菌在农业中的应用。另外，目前微生物肥料应用的另外一个瓶颈为施肥后有益微生物在土壤中的定殖问题。施肥后如何为微生物创造一个适宜的环境，促进其快速生长，从而发挥营养和生防作用，是发挥微生物肥料之真正功效的关键。因此，性能良好的菌株、适宜营养载体的选择是微生物肥料开发的关键问题。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种稳定性好、存活期限长的拮抗菌伯克霍尔德氏菌LH-ZY01（burkholderia sp.），本发明还提供了伯克霍尔德氏菌LH-ZY01（burkholderia sp.）在抑制立枯丝核菌中的应用。 

上述拮抗菌是从已经发病的植株和土壤中分离得到，其16S rDNA序列如序列表1所示。 

该菌经NCBI在线比对与伯克霍尔德氏菌具有99%的一致性，结合其生理生化性质确定为伯克霍尔德氏菌属的菌株。 

伯克氏菌属 LH-ZY01（burkholderia sp. LH-ZY01），该菌种于2012年12月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO： M 2012536，保藏地址是：中国武汉武汉大学。 

上述的伯克霍尔德氏菌LH-ZY01（burkholderia sp.），该菌种的生物学特性为：革兰氏染色阴性（G^-），细胞性状为短杆状，颜色为土黄色，好氧，生理生化性状为：反硝化反应：阴性，柠檬酸盐利用；阳性，亮氨酸利用：阳性，接触酶：阳性，酒石酸盐利用：阳性。 

伯克霍尔德氏菌LH-ZY01（burkholderia sp.）生产的微生物有机肥料，具体特点为：含有2×10⁸个/g以上的拮抗菌微生物、全氮含量为4.0~5.5%，所述的全氮中有90%以上是有机氮，总氮磷钾养分为7.0~12%，有机质含量为45~50%。 

采用伯克霍尔德氏菌LH-ZY01（burkholderia sp.）生产有机肥的方法，该方法包括下述的步骤： 

（1）从斜面活化，经过种子扩大培养，最后进行发酵生产，其生产条件具体为：pH生长范围自然，培养温度25~38℃，溶氧：28%~100%条件下通气量范围为150~260转/分钟，液体培养基为本实验室优化，发酵周期36~48小时，发酵的拮抗菌液含菌量≥1×10¹⁰ cfu/L；

（2）将伯克霍尔德氏菌LH-ZY01（burkholderia sp.）制备成微胶囊，具体配方：海藻酸钠：15~30 g/L，氯化钙：30~50 g/L，脱脂奶粉：10~30g/L，菌液：1.0×10¹² cfu/L；制备微胶囊的具体的条件是：按照上述的配方及比例将菌液、海藻酸钠跟脱脂奶粉在容器罐中混合搅匀然后喷或滴加到氯化钙溶液中形成包膜胶囊，静置2~4小时后将成膜胶囊通入28-32℃的干燥空气干燥；