[发明专利]一种非冻型RNA保护液

说明书

技术领域

本发明涉及生物学领域中如何保存生物样品中RNA完整性的方法，具体地涉及在常温下保存生物样品使其RNA免受降解的方法。

技术背景

提取和纯化完整的、未发生降解的RNA分子是研究和检测RNA的前提。分子生物学实验例如Northern杂交、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等都需要使用高质量的、完整的RNA分子。常见的用于提取RNA的生物样品包括人体组织、动物组织、植物组织、人工培养的细胞(动物细胞、酵母细胞、细菌细胞)、血液细胞等。由于组织内部存在的内源性RNA分解酶RNase和环境中的外源性RNase对RNA的降解威胁，提取RNA时一般使用新鲜的组织或细胞，在提取完成后将RNA溶解在严格不含RNase的水或缓冲液中，于低温下(-20℃～-80℃)保存，才能保证RNA结构的完整，用于下一步的实验研究。

在无法及时进行RNA提取的情况下，样本在离开其细胞最佳生活状态后都应该尽快地以妥善的方法保存起来。实验室中的常用方法为低温保存，即保存于-20℃至-80℃的低温冰箱中，最好是保存在液氮中，以抑制生物样本中RNase的活性。尽管将样品冷冻起来是一种常规有效的样品保存方法，然而在实际操作中常常出现不能及时将样品保存在低温环境的情况；例如手术中临床样本采集、野外样品采集、样品运输等，需要在常温下保证样品中的RNA分子不被降解。

本发明提供了一种非冻型RNA保护液，是一种在较高温度下保存生物组织、细菌、真菌及细胞样本中RNA结构完整性的非冻型溶液，其操作安全。它的作用机理为：常温下迅速渗入细胞内，高效抑制RNase的活性，从而使RNA的结构保持完整。获取组织或细胞样本后立即浸入RNA保存液中保存，在室温(25～35℃)可保存14～42天，在4℃可以保存120天，在-20℃、-80℃可以长期保存。将样品取出后可用各类RNA提取方法获得高质量的RNA。

发明内容

本发明提供了一种非冻型RNA保护液，能够在较高温度下(25～35℃)保存生物组织、细菌、真菌、细胞样本中RNA结构的完整性，保存的样本可以用各类常规的RNA提取方法提取出高质量的RNA；实验操作安全可靠。

本发明提供的非冻型RNA保护液配方见表1：

表1：非冻型RNA保护液配方

成分浓度聚乙烯亚胺20mg～200mg/mL氯化铵5mg～2g/mL乙二胺四乙酸及其二钠盐10mmol/L～1.0mol/L乙二醇二乙醚二胺四乙酸10mmol/L～1.0mol/L

根据目标样品的不同，例如人体组织、动物组织、植物组织、细菌、真菌、细胞等，保护液对样本的渗透效率稍有差别，本发明的发明人经过反复尝试，进行了大量的对比实验，对各因素进行优化，摸索出了可同时适用于上述样本的保护液配方。其中各成分的最适浓度分别为：

聚乙烯亚胺的浓度为20mg/mL～200mg/mL，最适浓度为85mg/mL～125mg/mL；

氯化铵的浓度为5mg/mL～2g/mL，最适浓度为58mg/mL～94mg/mL、180mg/mL～220mg/mL、1.05g/mL～1.38g/mL；

乙二胺四乙酸及其二钠盐浓度为10mmol/L～1.0mol/L，最适浓度为110mmol/L～230mmol/L、780mmol/L～950mmol/L；