[发明专利]一种收集液体培养真菌菌丝体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种收集液体培养真菌菌丝体的方法。

背景技术

在微生物实验室工作中经常需要将液体培养出来的少量真菌菌丝体与其发酵液进行分离，例如在提取真菌菌丝体总RNA、DNA以及蛋白时就需要将菌丝体从发酵液中分离出来；而在提取、分离、检测培养液中的小分子化合物时也需要将菌丝体从发酵液中分离出去，等等。然而，液体培养出来的不同属的真菌菌丝体的形态特征不同，菌丝之间纠结的紧密程度也不同。如果需要利用菌丝体提取其总RNA、DNA以及蛋白时，由于收集的菌丝体残留的发酵液中含有很多种菌丝分泌的小分子化合物、蛋白等物质，会干扰实验结果；相反，如果需要研究真菌发酵液的特性及成份时，残留的菌丝体也会干扰实验结果。因此，采取什么样的方法将它们分离开将直接影响后续实验的进程及结果。目前，多数是采用高速离心法和减压抽滤法将菌丝体从发酵液中分离出来，然而，这两种分离方法都存在的关键问题是对某些液体培养菌丝体收集的效果差。一方面，对于离心法，即使采用的离心速度很高也很难将悬浮的菌丝体完全密实地沉降到试管底部，导致分离上清液后收集到的菌丝体仍含有较多的上清液，分离效果不好。另一方面，对于减压抽滤法，由于液体培养获得的真菌菌丝体，其生长量、菌丝的纠结状态和发酵液的粘稠度受真菌的种属、培养基组分、接种量、培养条件等多种因素的影响，经减压抽滤后对某些菌丝体收集效果好；而对有些菌丝体的收集效果差。此外，这两种方法均须采用仪器设备，成本高、耗电、操作步骤多、实验准备时间相对较长。

发明内容

本发明是要解决现有分离方法—高速离心法和减压抽滤法对某些液体培养菌丝体收集效果差，以及操作步骤多、收集速度慢、耗电、成本高的问题，提供了一种收集液体培养真菌菌丝体的方法。

本发明一种收集液体培养真菌菌丝体的方法，是通过以下步骤进行的：将6～10层纱布置于容器开口上，然后将真菌菌丝培养液的混合物平摊于纱布上，再将纱布卷起，然后反向拧紧纱布，待无液体流下时，展开纱布，分别收集纱布上的真菌菌丝体和容器中真菌的发酵液，即完成收集液体培养真菌菌丝体的方法。

本发明获得的菌丝体含水量低，具有操作简单、节能，成本低，分离速度快的优点。采用本发明方法获得不同种属的6种真菌菌丝体，由于菌丝体被分离的速度快，菌丝体间的发酵液含量少，提取的总RNA均未出现降解现象，并且与高速离心法和减压抽滤法相比，本发明获得的总RNA质量良好，产量最高，适合用于实验室收集少量液体培养的真菌菌丝体。因此，此方法具有极大的推广价值。

附图说明

图1为试验中培养的球毛壳菌的照片；

图2为试验中培养的核盘菌的照片；

图3为试验中培养的链格孢菌的照片；

图4为试验中培养的尖孢镰刀菌的照片；

图5为试验中培养的棘孢木霉的照片；

图6为试验中培养的立枯丝核菌的照片；

图7为试验组将纱布置于容器开口的示意图；

图8为试验组将真菌菌丝培养液的混合物平摊于纱布的示意图；

图9为试验组反向拧紧纱布的示意图；

图10为试验1得到的球毛壳菌菌丝体的照片；

图11为试验1得到的核盘菌菌丝体的照片；

图12为试验1得到的链格孢菌菌丝体的照片；

图13为试验1得到的尖孢镰刀菌菌丝体的照片；

图14为试验1得到的棘孢木霉菌丝体的照片；

图15为试验1得到的立枯丝核菌菌丝体的照片；

图16为试验组得到6种真菌菌丝体中的总RNA电泳图；

图17为对照组1的球毛壳菌菌丝培养液高速离心后的照片；

图18为对照组1的核盘菌菌丝培养液高速离心后的照片；

图19为对照组1的链格孢菌菌丝培养液高速离心后的照片；

图20为对照组1的尖孢镰刀菌菌培养液高速离心后的照片；

图21为对照组1的棘孢木霉菌丝培养液高速离心后的照片；

图22为对照组1的立枯丝核菌菌丝培养液高速离心后的照片

图23为对照组1得到的球毛壳菌菌丝体的照片；

图24为对照组1得到的核盘菌菌丝体的照片；

图25为对照组1得到的链格孢菌菌丝体的照片；

图26为对照组1得到的尖孢镰刀菌菌丝体的照片；

图27为对照组1得到的棘孢木霉菌丝体的照片；

图28为对照组1得到的立枯丝核菌菌丝体的照片；