[发明专利]一种烟草及烟草制品中尼古丁生物碱的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体为一种烟草及烟草制品中尼古丁生物碱的检测方法。

背景技术

烟草生物碱是烟草及烟草制品的重要组成部分，其中尼古丁生物碱也称烟碱，占烟草生物碱总量的98％，占整个烟草干重的1％-3％。一方面，尼古丁生物碱是导致吸烟成瘾的重要诱因，且本身有剧毒；另一方面尼古丁及其他含量较低的生物碱的存在和含量高低影响香烟的口感和品质，而现行的国家标准中没有专属检测尼古丁的方法，且共存生物碱的存在常常干扰尼古丁生物碱的检测结果，因此需要建立烟草及烟草制品中尼古丁的灵敏、快速且专属性强的检测方法。

尼古丁生物碱在260nm的紫外区有响应，同时有电化学和电化学发光响应，因此目前人们已经建立了紫外分光光度法、电化学法和电化学发光法来检测烟草中的尼古丁生物碱。但由于紫外分光光度法、电化学法和电化学发光检测法是通用的检测方法，因此检测中受干扰较多。与气相色谱、液相色谱、毛细管电泳等复杂体系的分离技术相结合能够有效克服上述检测中遇到的问题。因质谱分辨率高，定性能力强，对分离的条件要求相对较低，因此常与气相色谱、液相色谱和毛细管电泳等联用用于烟草和烟草制品中尼古丁及其他生物碱的定性和定量分析。但质谱仪价格昂贵，维持费用和使用费用高，且对操作技术的要求高，限制了它在日常分析中的应用，因此开发成本低廉且操作简便的用于烟草及烟草制品中尼古丁生物碱的分析方法至关重要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有烟草尼古丁生物碱检测技术中常用分离手段与MS检测联用时仪器价格昂贵、维持费用高和操作技能要求高的问题，开发维持费用低、操作简单同时准确性高、分析速度快的分析方法。

本发明烟草及烟草制品中尼古丁生物碱的检测方法包括如下步骤：

1，取烟丝样品，加入水作为萃取溶剂，超声萃取，微孔滤膜过滤，收集滤液，流动相稀释后作为进样溶液；

2，利用高效液相色谱-紫外检测联用分析上述样品溶液，对烟丝中尼古丁生物碱进行定性和定量。

步骤1中，烟丝与萃取剂水的比例为200mg∶20mL。

步骤1中，超声萃取时间为30min，萃取之间静置时间10min，超声萃取之后静置时间10min。

步骤1中，收集滤液，流动相稀释倍数为10。

步骤2中，所述分离和检测条件为：检测波长260nm，色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18柱(4.6mm×250mm×5μm，Agilent)，流动相为甲醇∶20mmol/L KH₂PO₄∶三乙胺＝10∶90∶0.05％(v：v，以H₃PO₄调节pH至3.2)，流速1.0mL/min。以尼古丁标准品溶液中尼古丁生物碱的保留时间对烟草和烟草制品中的尼古丁生物碱定性，外标法定量。

本发明与现有技术相比有如下有益效果：

(1)本发明中所用萃取溶剂仅为水，操作步骤简便，对环境无害，对操作者身体健康无任何影响，且所得萃取液可直接用于动物实验。

(2)以水为萃取剂，回收率高，能够完全萃取烟丝中的尼古丁生物碱和其他水溶性的生物碱，方法准确度高。

(3)本发明所采用的分离检测方法为HPLC-UV，仪器价格低廉，维护和运行成本低，利于方法的推广。

(4)本发明中检测方法中所采用的流动相有机相所占比例小，对环境污染少，利于保护操作者的身体健康。

附图说明

图1为实施例中尼古丁生物碱标准溶液的HPLC谱图；

图2为实施例中烟草样品萃取液的HPLC谱图。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明做进一步描述。实施例仅用于本发明而不限于本发明的范围。

实施例中的烟丝样品一种来自安徽中烟集团的黄山牌香烟，两种来自湖南中烟集团的万宝路和白沙香烟，一种来自广东省湛江市廉江烟丝厂烟丝；

尼古丁标准品购自美国Sigma-Aldrich；

高效液相色谱仪为岛津LC-20AT；检测器为SPD-20A型紫外检测器；色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18柱(4.6mm×250mm×5μm，Agilent)；超声波清洗仪购自昆山超声仪器有限公司。

实施例

1，样品制备

配制浓度为1.0mg/mL的尼古丁甲醇储备液，并于低温暗处冷藏保存；低浓度系列由储备液经流动相逐级稀释而得，并同样于冰箱暗处冷藏保存。