[发明专利]咖啡酸糖苷衍生物及其制备方法

权利要求书

1.一种咖啡酸半乳糖苷混合物，有效成分为咖啡酸3′-O-β-D-吡喃半乳糖苷和咖啡酸4′-O-β-D-吡喃半乳糖苷，分子式为C₁₅H₁₈O₉，咖啡酸3′-O-β-D-吡喃半乳糖苷的化学结构式如下：

咖啡酸4′-O-β-D-吡喃半乳糖苷的化学结构式如下：

2.如权利要求1所述的咖啡酸半乳糖苷混合物，其特征在于，所述的混合物中咖啡酸3′-O-β-D-吡喃半乳糖苷与咖啡酸4′-O-β-D-吡喃半乳糖苷的质量比为1:3。

3.权利要求1所述咖啡酸半乳糖苷混合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）采用磷酸缓冲液配制乳糖浓度为0.1M～0.3M，咖啡酸浓度为0.05M～0.2M，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-半乳糖苷酶添加量为2μg～10μg/mL的反应体系；

（2）将步骤（1）制得反应体系于37～45℃水浴中反应20～60分钟，煮沸终止反应，10000～12000转/分钟离心20分钟，取上清液；

（3）将步骤（2）制得的上清液，经分离、干燥后，制得咖啡酸半乳糖苷。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中的磷酸缓冲液为浓度10～100mM，pH6～8的磷酸钾缓冲溶液；根据本发明进一步优选的，所述步骤（1）中的缓冲液为50mM，pH7.0的磷酸钾缓冲液。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的反应条件为45℃水浴反应45分钟。

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的煮沸终止反应条件为100℃煮沸5分钟。

7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的分离为用规格15mm ID×100cm的Bio-gel P2色谱柱进行色谱分离，以水为流动相，收集洗脱样品。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，上述色谱分离的样品上样量为1～2mL，洗脱流速为0.2～0.3mL/分钟；最优的，样品上样量为1mL，洗脱流速为0.2mL/分钟。

9.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的干燥为冷冻干燥。

10.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中还包括分离后的薄层层析检测、合并迁移距离相同的产物的步骤；

上述薄层层析检测的步骤如下：

取1μL洗脱液，薄层层析板点样，在展层剂中展开，雾喷显色剂后，于120℃烘烤5分钟使糖斑点显色。

上述展层剂由正丁醇、无水乙醇和水按体积比5：3：2混合配制；显色剂是体积百分比为20%的硫酸和浓度为0.5wt%的3,5-二羟基甲苯的溶液。