[发明专利]一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于测定降钙素原的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包括稀释液、胶乳制剂、空白液、校准品和质控品；其中所述的胶乳制剂中含有分别偶联了PCT单克隆抗体以及PCT多克隆抗体的不同粒径大小的羧基化的聚苯乙烯胶乳。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，偶联了PCT单克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的粒径为76nm，偶联了PCT多克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的粒径为187nm。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的稀释液为含有2M NaCl，2％（w/w）PEG20000，0.5%（w/w）BSA，0.1%（w/w）proclin-300的0.05M Tris-HCl缓冲液，pH=8.4。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的胶乳制剂是按照以下方法制备得到的：

（1）羧基化的聚苯乙烯胶乳活化

10mg/ml的羧基化的聚苯乙烯胶乳1ml中加入50mM，PH6.1MES溶解的1mg EDC（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）和10mgNHS（N-羟基琥珀酰亚胺）混匀活化60分钟，离心8000rpm弃去上清，沉淀用PH7.4的50mM PBS重悬；按照上述方法分别制备得到了粒径为76nm和187nm活化后的羧基化的聚苯乙烯胶乳；

（2）偶联了PCT单克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的制备

将1mg PCT单克隆抗体加入2ml浓度为10mg/ml的粒径为76nm胶乳溶液中，室温混匀2-4小时，2-8℃8000rpm离心15min，收集上清液备用，加入含有5mg BSA的50mM PBS，室温混匀1-2小时；2-8℃8000rpm离心15min，弃掉上清液，沉淀中加入5ml50mM的甘氨酸，充分混匀30min；2-8℃8000rpm离心15min，弃掉上清液，沉淀使用5ml Tris-HCl缓冲液复融胶乳；

（3）偶联了PCT多克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的制备

将0.5mg PCT多克隆抗体加入2ml浓度为10mg/ml的粒径为187nm的胶乳溶液中，室温混匀2－4小时，2-8℃8000rpm离心15min，收集上清液备用，加入含有2.5mgBSA的50mM PBS，室温混匀1-2小时；2-8℃8000rpm离心15min，弃掉上清液，沉淀中加入5ml50mM的甘氨酸，充分混匀30min；2-8℃8000rpm离心15min，弃掉上清液，沉淀使用5ml Tris-HCl缓冲液复融胶乳；

（4）将两种胶乳溶液进行混合。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于步骤（4）中，是将两种粒径的胶乳试剂进行体积比1：1混合，充分混匀后备用。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于步骤（2）或步骤（3）中所述的缓冲液为含有1%（w/w）BSA，0.05％（v/v）吐温，0.1%（w/w）海藻糖、0.1g/L羧甲基纤维素钠，0.1%（w/w）NaN3的0.05M Tris-HCl缓冲液，pH=7.4。

7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的空白液为0.05M PBS磷酸缓冲液。

8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的校准品包括降钙素原浓度分别为0、0.1、0.5、2.5、10、30μg/L的校准品。

9.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的质控品中降钙素原的浓度为0.21-0.29μg/L。

10.权利要求1-9任一项所述的试剂盒在制备检测降钙素原试剂中的应用。