[发明专利]一种能够抗氧化的缢蛏多肽的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于海洋功能食品类，具体是一种能抗氧化的海洋功能食品及其制备方法。

背景技术

海洋贝类资源丰富且富含许多生理活性物质，因而逐渐被广泛研究和应用。缢蛏(Sinonovacula constricta)俗名蛏子，属瓣鳃纲、异齿亚纲、帘蛤目、灯塔蛤科、缢蛏属，在我国沿海均有分布，产量较大，为我国四大养殖贝类之一[安贤惠，李联泰。缢蛏研究现状及发展前景[J].科学养鱼，2005(1)：4-6.]，缢蛏肉味鲜美，营养丰富，富含人体生命活动所需的各种必需氨基酸、不饱和脂肪酸等营养物质[李太武，林 叶，苏秀榕，不同群体缢蛏营养成分的多元性分析[J]，食品科学，2008，29(11)：548-551；Remacha，Trivino A，Anadon.Reproductive cycle of the razor clam Solen marginat us(Pulteney 1799)in Spain：acomparative study in three different locations[J]，Journal of shellfish research，2006，25(3)：869-876；安贤惠，几种缢蛏的营养性和健康性分析评价[J]，海洋湖沼通报，2005(4)：99-103；李太武，林 叶，苏秀榕，不同群体缢蛏营养成分的多元性分析[J]，食品科学，2008，29(11)：548-551；林 叶，苏秀榕，孙 蓓等，不同种群缢蛏氨基酸及脂肪酸比较研究[J]，食品科学，2006，27(12)：675-678]。

缢蛏性寒、可补阴去邪热，治烦闷、冷痢、热痢、妇人产后虚损、虚热等症，具有较高的药用食用价值[蒋忠妙，郑国平，陈木森.舟山群岛海洋药用动物资源及民间应用的调查[J].中国海洋药物，2002，85(1)：35.；苏 晶，苏明翥编著，水产品药用巧治百病[M].沈阳：辽宁科学技术出版社，2000，187.]；缢蛏的活性成分还具有较高的研究价值，如雷晓凌等[雷晓凌，吴红棉，范秀萍等，缢蛏糖胺聚糖的提取分离及其体外抗肿瘤活性的初步研究[J]，药物生物技术，2004，11(3)：146-149]，对缢蛏肉的酶解条件进行研究，发现提取得到的糖胺聚糖对体外培养的HL-60细胞均有一定抑制作用，且随着用量增加抑制作用增强。

活性多肽由于具有敏感性高、稳定性好及副作用少等优点，已被用作抗氧化药物开发的一个重要来源。研究已经证实，食物蛋白通过蛋白酶酶解方式，可以得到功能多样的活性多肽[郑惠娜，章超桦，曹文红.海洋蛋白酶解制备生物活性肽的研究进展[J].水产科学，2008，27(7)：370.]。对于缢蛏，在抗氧化方面的研究还很少，特别是利用酶解技术提取多肽在抗氧化方面的研究并未见报道。

本研究通过正交实验确定胰蛋白酶水解缢蛏的最佳酶解条件，并研究酶解多肽的体外抗氧化活性，为该领域的进一步研究提供科学依据，并且对于进一步研究与开发以缢蛏酶解多肽为基础的功能性食品和药物，提高缢蛏的经济价值具有重大意义。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种缢蛏酶解多肽的制备方法，以DPPH清除率为指标，通过正交实验进行酶解，获得DPPH清除率最大的酶解条件。在此酶解条件下进行酶解，得到缢蛏酶解多肽，具有制备工艺简单、易操作等特点。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种缢蛏酶解多肽的应用，缢蛏酶解多肽敏感性高、稳定性好及副作用少，具有体外抗抗氧化的作用。

本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：一种缢蛏酶解多肽的制备方法，其特征在于步骤为：

1)前处理：将缢蛏去壳、洗净绞碎，按料液质量比1∶1～4加水匀浆，调节pH值至7～8；

2)酶解：加入蛋白酶进行酶解，蛋白酶的加入量为缢蛏质量的0.2％～0.3％，酶解温度为60～70℃，酶解时间2～6小时；

3)酶解后灭酶处理，再离心取上清液即为酶解液；

4)将酶解液经超滤、G-25凝胶色谱柱层析后收集的各个洗脱峰浓缩后冷冻干燥，将干燥后得到的各个峰组分采用DPPH清除率进行抗氧化实验，确定目标肽所在的洗脱峰，并对该峰大量收集，浓缩并冷冻干燥；

5)最后，采用反相高效液相色谱进行洗脱纯化得到所需的缢蛏酶解多肽。

作为优选，所述步骤1)的料液质量比1∶2，pH值为8。

作为优选，所述步骤2)的蛋白酶为胰蛋白酶，蛋白酶的加入量为900U/g，酶解温度为30℃，酶解时间6小时。