[发明专利]一种人源抗TLR4抗体Fab及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种人源抗TLR4抗体Fab，其特征在于，轻链的互补决定区CDR具有以下的CDR氨基酸序列：

SEQ ID NO.1 所示的CDR1;

SEQ ID NO.2 所示的CDR2；

SEQ ID NO.3 所示的CDR3;

并且所述抗体的Fd链的互补决定区CDR具有以下的CDR氨基酸序列：

SEQ ID NO.4 所示的CDR4;

SEQ ID NO.5 所示的CDR5；

SEQ ID NO.6 所示的CDR6。

2.一种人源抗TLR4抗体Fab，其特征在于，所述抗体轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.7 所示，抗体Fd链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

3.根据权利要求2所述的人源抗TLR4抗体Fab，其特征在于，轻链氨基酸序列为SEQ ID NO.9所示，Fd链氨基酸序列为SEQ ID NO.10所示。

4.一种编码人源抗TLR4抗体Fab的DNA分子，其特征在于，轻链可变区核酸序列为SEQ ID NO.11所示，Fd链可变区核酸序列为SEQ ID NO.12所示。

5.根据权利要求4所述的编码人源抗TLR4抗体Fab的DNA分子，其特征在于，轻链核酸序列为SEQ ID NO.13所示，Fd链核酸序列为SEQ ID NO.14所示。

6.一种人源抗TLR4抗体Fab的制备方法，包括以下步骤：

（1） 全人源Fab噬菌体抗体库的构建

本发明从50例重症肝炎患者的全血中分离的B淋巴细胞中，扩增所有抗体重链、轻链可变区基因，采取基因工程方法，构建了库容量为5.76×10⁹的全人源Fab抗体库；

（2） 抗TLR4抗体Fab的筛选、表达及纯化

用重组的TLR4蛋白对噬菌体抗体库进行富集筛选，分离并筛选1株抗TLR4的特异性人源Fab抗体；

（3） 抗TLR4全人源Fab抗体的制备

将Fab的表达载体转化大肠杆菌E.coli.TOP10，挑选阳性工程菌，经IPTG诱导表达，细菌表达的Fab经Protein L柱亲和纯化后，用于抗体的功能分析；

（4） 抗TLR4全人源Fab抗体特性分析

Western blot结果显示，纯化蛋白的目的条带与预期大小一致，分别为Fab的Fd链和L链；ELISA分析结果显示，抗TLR4的Fab能够与TLR4蛋白结合，但不结合阴性对照蛋白BSA；

（5） 抗TLR4抗体Fab对LPS诱导TNF-α表达的影响。

7.权利要求1-3中任意一条所述的人源抗TLR4抗体Fab，其特征在于，其在抑制TLR4介导的炎症反应中的用途。

8.权利要求1-3中任意一条所述的人源抗TLR4抗体Fab在制备抑制TLR4介导的炎症反应药物中的应用。

9.一种抑制TLR4介导的炎症反应的药物，其特征在于有效成分为人源抗TLR4抗体Fab。