[发明专利]一种用于检测TTR基因突变G307C的试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用于检测导致遗传性玻璃体淀粉样变患者视力严重损伤或丧失的TTR基因突变G307C的试剂盒，属于遗传性视力研究技术领域。 

背景技术：

家族遗传性淀粉样变（Familial amyloidotic polyneuropathy,FAP; MIM#105210）是一种常染色体显性遗传性代谢病，能够引起多个器官组织的病变，该病可以累及肾脏、心脏、外周神经、玻璃体等组织或器官。家族性淀粉样变性在世界多个国家有报道，患者常在他们30-40岁期间发病。很多基因的突变是家族性淀粉样变性的致病因素，其中最常报道的基因是转甲状腺素蛋白基因（transthyretin，TTR）的突变，约99%的家族淀粉样变性患者是由TTR基因突变造成的。TTR基因编码的蛋白以四聚体的形式存在，它主要功能是转运甲状腺素和维生素A。TTR蛋白仅存在于脊椎动物中并且保守性很高。目前为止，已有超过100个TTR基因的突变导致的FAP被报道，其中患者人群中发生频率最高的突变是TTR蛋白的第30位的缬氨酸突变成蛋氨酸，特别是在日本、瑞典和葡萄牙人群中该突变所占比例更高。该病的具体发病机理尚未明确，肝移植手术是目前有效的治疗方法，但是由于肝源和手术费用的限制，这一治疗方法在临床上的应用较局限。 

家族性淀粉样变性患者的临床表型异质性现象非常明显，具有相同TTR基因突变的不同淀粉样变家系，其临床表型可能完全不同。有一些家族性淀粉样变性的患者首先出现或唯一累及的器官是玻璃体，这类家系为遗传性玻璃体淀粉样变家系。玻璃体淀粉样变（Familial hereditary vitreous amyloidosis, HVA）是一种临床症状仅（或主要）表现为无诱因性视力严重损伤甚至丧失的遗传病，绝大多数也是由TTR基因的突变导致疾病的发生，这类患者的的发病年龄也多为30-40岁之间，早期正确的诊断可以提高该病的治愈效率。我国有关FAP疾病的病例 报道较少，也许是由于目前临床上缺乏准确的分子诊断方法。目前为止，发现9个中国HVA家系被报道，其中6个家系是由TTR基因的突变G307C（p.G83R）致病（其中包括我们发现了3个HVA家系），即TTR基因编码序列307位的鸟嘌呤突变成胞嘧啶，这导致了TTR蛋白第83位的甘氨酸突变为精氨酸。 

由于HVA患者能够通过进行玻璃体切除填充术进行治疗，且其治疗效果与发病时间长短有关，因此临床上对该类患者的早期确诊，有助于临床治疗。突变p.G83R在中国HVA家系中发生的频率高达67%，对中国HVA患者的这一突变进行检测，将极大的提高临床确诊率，有效的缩短诊断时间，提高治愈率，在临床应用上有重要价值。HVA患者TTR基因突变的检测，不仅能有效的应用于临床诊断和治疗，还能应用于产前诊断和新生儿遗传疾病的筛查，进行提早干预，从而减轻家庭和社会负担。此外，通过对HVA患者的TTR基因G307C的检测，还有助于我们研究和了解HVA的致病机理，为后续开展基因治疗奠定基础。 

经文献检索，未见与本发明检测突变位点相同的公开报道。 

发明内容：

本发明的目的在于提供一种用于检测TTR基因突变G307C的试剂盒。 

本发明通过检测来自患者的样本中是否存在TTR基因突变G307C（p.G83R），进而判断该患者失明的遗传致病因子和疾病类型。其中，所述的p.G83R指由TTR基因的编码序列307位碱基突变（G307C）导致的该蛋白第83位的中性的甘氨酸变为碱性的精氨酸，这一氨基酸改变导致了TTR蛋白高级结构的变化，使其功能改变从而致病。 

发明人用候选基因筛查的方法，在中国3个玻璃体淀粉样变家系中发现与这些家系失明相关的TTR基因的突变G307C。在这些遗传性失明的家系中，先证者和其他患者该位点突变均以杂合子的形式存在，而家系中未发病的正常人未检测到这一突变的存在，说明该突变与疾病的表型连锁关系紧密，是这3个家系失明患者的致病因素。目前，中国已发现9个由该基因突变导致的遗传性玻璃体淀粉样变的家系，其中6个家系存在突变G307C，说明TTR基因的G307C突变在中国玻璃体淀粉样变家系中具有较高的频率，能够作为中国此类疾病患者临床诊断的依据。目前国际上尚未见TTR基因G307C突变的报道。 

本发明的用于检测TTR基因突变G307C的试剂盒，包括用于检测位于TTR基因的突变G307C所需试剂和能选的用于扩增TTR基因的试剂，及PCR引物。 

用于检测TTR基因突变G307C的试剂盒，包括下述以下一种或几种试剂的组合： 

a.从待测样品中提取DNA的试剂；