[发明专利]转基因棉花T304-40的品系特异性检测方法及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学和核酸检测技术领域。更具体地，本发明涉及转基因棉花T304-40成分的品系特异性检测方法及其试剂盒。

背景技术

2012年，全球转基因作物种植面积达到1.703亿公顷，比2011年增长了6%。作为转基因作物商业化的第17年，在连续16年(1996-2011年)的增长后，2012年转基因作物种植面积持续增加。这一增长使得转基因技术以可观的利润成为现代农业史上应用最迅速的作物技术。

抗虫基因产品继耐除草剂产品之后在转基因作物产品中位居第二，如抗虫水稻、抗虫玉米、抗虫棉花等。2012年，印度和中国继续扩大转Bt基因抗虫棉花的种植面积。。转基因作物给人们带来巨大经济利益的同时，其可能存在的食品和生态安全问题也备受关注。为了加强转基因产品的安全监管，世界各国制订了一系列法律法规和政策来规范转基因作物种植、加工、运输、销售等各个环节，以维护消费者的切身利益。

在我国，除了Mon531，Mon1445，Mon15985，Mon88913和LLcotton25五种转基因棉花品系获得我国农业部颁发的农业转基因生物安全证书以外，还有很多转基因棉花品系未获得批准，棉花T304-40就是其中之一。转基因棉花T304-40品系是由拜耳公司研发的一种同时具有抗虫和耐除草剂复合性状的转基因棉花品种。这两个性状的产生是在常规棉中插入了杀虫(主要是鳞翅目昆虫)晶体蛋白Cry1Ab基因和耐草铵膦除草剂bar基因。目前该品系已在美国和加拿大种植。

我国每年从澳大利亚、美国等国家进口转基因棉籽（粕），但我国目前还未批准转基因棉花T304-40品系的安全证书。同时国内外还缺乏转基因棉花T304-40品系的检测方法。因此为了加强我国相关部门对转基因作物的安全检测和监管，防止未经我国安全性评价的转基因棉花品系进境，研发转基因棉花T304-40品系的检测方法至关重要。

发明内容

本发明的目的在于提供转基因棉花T304-40的品系特异性检测方法及其试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种鉴定转基因棉花T304-40成分的方法，所述方法包括：

以待测样品的DNA为模板，以引物进行PCR扩增；若发生特异性扩增，则表明待测样品中包含转基因棉花T304-40成分；

所述的引物选自：

(a)SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物对；或

(b)SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物对。

在一个优选例中，以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物以及SEQ ID NO:3所示的荧光探针进行实时荧光PCR检测。

在另一优选例中，以SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物以及SEQ ID NO:6所示的荧光探针进行实时荧光PCR检测。

在本发明的另一方面，提供用于鉴定转基因棉花T304-40成分的引物，所述的引物选自：

(a)SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物对；和/或

(b)SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物对。

在本发明的另一方面，提供用于鉴定转基因棉花T304-40成分的荧光探针，所述的探针序列如SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:6所示。

在本发明的另一方面，提供所述的引物和所述的荧光探针的用途，用于从待测样品中鉴定转基因棉花T304-40成分。

在本发明的另一方面，提供一种鉴定转基因棉花T304-40成分的试剂盒，其中包括：

SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物，SEQ ID NO:3所示的荧光探针；和/或

SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物，SEQ ID NO:6所示的荧光探针。

在一个优选例中，所述试剂盒中还包括：含有转基因棉花T304-40成分的DNA的检测阳性对照物质。

在另一优选例中，所述试剂盒中还包括选自以下的试剂：DNA提取试剂，PCR缓冲液，DNA聚合酶，和/或说明鉴定转基因棉花T304-40成分的方法的使用说明书。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、18SrRNA(A)和ACP1(B)实时荧光PCR扩增结果。