[发明专利]猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒，包括检测试纸，所述检测试纸包括PVC底板、滤样纸、免疫胶体金垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述滤样纸、免疫胶体金垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上，其特征在于：所述免疫胶体金垫上包被有胶体金标记的单克隆抗体2B8和4H9，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有单克隆抗体1F6和3D1的检测线和包被有抗鼠IgG抗体的质控线，

所述单克隆抗体3D1是由杂交瘤细胞株3D1所分泌的，所述单克隆抗体2B8是由杂交瘤细胞株2B8所分泌的，所述单克隆抗体4H9是由杂交瘤细胞株4H9所分泌的，所述单克隆抗体1F6是由杂交瘤细胞株1F6所分泌的，所述杂交瘤细胞株2B8、4H9、1F6、3D1保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号依次为CCTCC NO：C201375、CCTCC NO：C201376、CCTCC NO：C201377、CCTCC NO：C201374。

2.根据权利要求1所述的猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）制备胶体金；

2）用步骤1) 制备的胶体金分别标记单克隆抗体2B8和4H9，获得胶体金标记的单克隆抗体2B8和4H9；

3）免疫胶体金垫的制备：预处理玻璃纤维纸；浓缩步骤2) 获得的胶体金标记的单克隆抗体2B8和4H9，得到免疫胶体金溶液；用所述免疫胶体金溶液包被预处理过的玻璃纤维纸，获得免疫胶体金垫；

4) 将单克隆抗体1F6、3D1和抗鼠IgG抗体分别喷在硝酸纤维素膜检测线和质控线的位置上，烘干备用，制得免疫硝酸纤维素膜；

5) 将滤样纸、免疫胶体金垫、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在PVC底板上，切裁制得试纸条；

6) 将试纸条装入塑料盒，即获得猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒。

3.根据权利要求2所述的猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述胶体金的颗粒直径为35nm。

4.根据权利要求2所述的猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤4）中先将单克隆抗体1F6喷于硝酸纤维素膜的检测线上，隔0.3毫米再将单克隆抗体3D1喷于硝酸纤维素膜的检测线上。

5.根据权利要求2所述的猪流感病毒H3亚型胶体金检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述滤样纸的处理液中含有20mMTris-Cl、0.5%PVP-40、2%蔗糖、1%NaCl、1%酪蛋白，pH值为9.0。

6.权利要求1所述的胶体金检测试剂盒在猪流感病毒H3亚型抗原体外检测中的应用。