[发明专利]哺乳动物细胞表达系统

权利要求书

1.一种新型的哺乳动物细胞表达载体，其特征在于，所述的哺乳动物表达载体仅含有单个表达框，由一个强启动子带动目标基因、筛选标记基因和扩增标记基因的表达。这些基因之间通过IRES序列连接。

2.根据权利要求1所述的哺乳动物细胞表达载体，其中所述的单个表达框包括下列原件，且优选以如下顺序排列：(a)强启动子；(b)目标基因的克隆位点；(c)合成的IRES元件；(d)扩增标记基因；(e)FDMV IRES元件；(f)合成的大肠杆菌EM7元件；(g)筛选标记基因；(h)转录终止子；和(i)启动在大肠杆菌中起始复制的PUC序列。

3.根据权利要求2所述的哺乳动物细胞表达载体，其中所述的强启动子包括CMV、SV40、EF1-α、RSV、MLU、MPSV启动子，优选CMV启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4.根据权利要求2所述的哺乳动物细胞表达载体，其中所述的合成的IRES元件包括FMDV IRES序列和合成的GTX IRES序列。所述的FMDV IRES核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述的合成的GTX IRES核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

5.根据权利要求2所述的哺乳动物细胞表达载体，其中所述的扩增标记基因包括DHFR基因和GS基因，优选DHFR。

6.根据权利要求2所述的哺乳动物细胞表达载体，其中所述的筛选标记基因包括GFP、ZEO、HYP、NEO、RFP。

7.一种高效稳定的哺乳动物细胞表达系统，其特征在于，利用权利要求1-6任意一项权利要求所述的哺乳动物细胞表达载体，将目标基因转染到合适的哺乳动物宿主细胞，产生外源蛋白在哺乳动物细胞中的高效表达，所述的哺乳动物细胞表达系统包括：A.权利要求1-6任意一项权利要求所述的哺乳动物细胞表达载体；B.哺乳动物宿主细胞；C.将含有目标基因的表达载体转染到哺乳动物宿主细胞；D.筛选获得高表达目标基因的稳定细胞株。

8.根据权利要求7所述的哺乳动物细胞表达系统，其中所述的哺乳动物宿主细胞选自中国仓鼠卵巢CHO细胞，HEK293、BHK、NS0和Sp2/0，优选的哺乳动物宿主细胞是中国仓鼠卵巢CHO细胞。

9.根据权利要求7所述的哺乳动物细胞表达系统，其中所述的转染方法包括磷酸钙法，电转法，脂质体转染，优选的转染方法是电转法。

10.根据权利要求7所述的哺乳动物细胞表达系统，其中所述的筛选方法包括针对筛选标记的抗生素筛选和针对扩增标记基因的药物加压筛选。