[发明专利]一种猪圆环病毒样颗粒及其疫苗和制备方法无效
| 申请号： | 201310230557.X | 申请日： | 2013-06-09 |
| 公开（公告）号： | CN103436499A | 公开（公告）日： | 2013-12-11 |
| 发明（设计）人： | 李阳春;曹政 | 申请（专利权）人： | 重庆澳龙生物制品有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/04 | 分类号： | C12N7/04;A61K39/12;A61K39/39;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京汇泽知识产权代理有限公司 11228 | 代理人： | 张瑾 |
| 地址： | 402460 重庆市荣昌县*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 圆环 病毒 颗粒 及其 疫苗 制备 方法 | ||
1.一种猪圆环病毒的病毒样颗粒，其特征在于：所述病毒样颗粒由猪圆环病毒的核衣壳蛋白组成。
2.根据权利要求1所述的病毒样颗粒，其特征在于：所述核衣壳蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～15所示。
3.根据权利要求1所述的病毒样颗粒，其特征在于：所述核衣壳蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.16～30所示。
4.含有权利要求1-3任一项所述病毒样颗粒的疫苗。
5.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗为注射剂、滴鼻剂或饮水剂型。
6.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗的佐剂为纳米铝、氢氧化铝或磷酸铝、水凝胶、季胺化的壳聚糖或重组不耐热性肠毒素中的一种或多种。
7.权利要求1-3任一项所述病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将编码猪圆环病毒核衣壳蛋白的核苷酸构建重组真核表达载体，然后将重组真核表达载体转化表达细胞，培养后将培养物经纯化即得病毒样颗粒。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述真核表达载体为pET32a载体，pOPI3CAT载体，pCAGGS载体，pcDNA6/TR载体或pCMV-HA载体。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述表达细胞为UMNSAH/DF-l细胞，分离9-10龄禽成纤维细胞，PK-15细胞，VERO细胞，COS细胞，人二倍体细胞，BHK细胞，CHO细胞，MDCK细胞，Hep-G2细胞，Tn5细胞或SF9Cell细胞。
10.根据权利要求7-9任一项所述的制备方法，其特征在于，培养物的纯化方法为：收集细胞培养液，4℃、5000rmp条件下离心10min，取上清液于100000g、4℃条件下离心2小时，沉淀用HNE buffer悬浮，HNE buffer的组成为25mM Tris-HCl pH7.4，150mM NaCl，5mM EDTA；然后将悬液进行蔗糖梯度离心，蔗糖采用HNE buffer配制，体系采用0.3g/mL蔗糖3mL，0.45g/mL蔗糖3mL，1.37g/mL蔗糖1mL，然后与4℃、100000g条件下离心2h，收集中间层，并用折射仪测量密度；用pH6.5-7.5的PBS平衡Sepharose6FFTM介质进行凝胶层析纯化，收集外水体积流穿峰；再采用DEAE-SepharoseFFTM介质进行离子交换层析，平衡液为pH6.5-7.5、含有0.05-0.15M氯化钠的PBS，洗脱液为含0.2-0.5M氯化钠、pH6.5-7.5的PBS，纯化后液体即为病毒样颗粒。
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