[发明专利]对羟基苯乙酮葡萄糖苷在制备抗自身免疫病和抗移植排斥疾病药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物。具体涉及药物的新用途，尤其涉及对羟基苯乙酮葡萄糖苷在制备抗自身免疫病和抗移植排斥疾病药物中的应用。 

背景技术

现有的免疫抑制剂主要有环孢素A（CsA）、肾上腺皮质激素、雷帕霉素等。但是，由于这些药物大多具有明显的不良反应，如肾毒性以及对细胞的非特异性等，并且价格高，增加患者经济负担，因此，限制了它们在临床上的应用。 

对羟基苯乙酮葡萄糖苷是一种从中药兔耳风（Incarvillea delavay）提取的有效成分生物碱类物质，目前已发现兔耳风具有抗菌、抗炎、止血、抗病毒、肝保护和抗肿瘤等作用。 

树突状细胞（Dendritic cells，DCs）是目前已知的机体中功能最强的抗原提呈细胞，能有效激活初始T细胞增殖分化，调节固有免疫应答细胞和适应性免疫应答细胞的功能，在免疫应答中起主要的作用。而实验性自身免疫性脑脊髓膜炎（EAE）、迟发型超敏反应和心脏移植排斥等都是典型的自身免疫病和移植排斥模型。 

本发明人对对羟基苯乙酮葡萄糖苷的药理作用进行了研究，通过对健康人外周血DCs的分离和培养，并探讨了对羟基苯乙酮葡萄糖苷对DCs在体外诱导分化及功能成熟的影响。发现对羟基苯乙酮葡萄糖苷可参与对DCs增殖分化及免疫刺激能力的抑制作用，且能促进抑炎性细胞因子IL-10的分泌。另外，本发明人还通过动物实验考察了对羟基苯乙酮葡萄糖苷对自身免疫病和移植排斥的预防和治疗作用。因此，如何利用中药兔耳风及其有效成分进行预防和治疗自身免疫病和移植排斥是研究的重要方向。 

基于上述药理作用，本发明人预计对羟基苯乙酮葡萄糖苷可以用做免疫抑制剂，特别是作为一种抗自身免疫病和抗移植排斥免疫抑制药。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于研究对羟基苯乙酮葡萄糖苷的药理作用，设计其制备抗自身免疫疾病和抗移植排斥疾病的药物。 

本发明提供了对羟基苯乙酮葡萄糖苷在制备抗自身免疫病和抗移植排斥疾病药物中的应用。 

本发明所述对羟基苯乙酮葡萄糖苷的结构式如下式所示： 

本发明人进行了系列的相关实验：（一）人树突状细胞（DCs）体外培养和对羟基苯乙酮葡萄糖苷对DCs的处理，对人树突状细胞分泌IL-10（白细胞介素10）的影响，对羟基苯乙酮葡萄糖苷刺激组及未刺激组体外单个核细胞转化树突状细胞分泌IL-10的浓度为2000±22pg/mL，1200±14pg/mL，相差有显著性差距（P<0.01）。（二）对羟基苯乙酮葡萄糖苷对T细胞转化的影响实验，发现经对羟基苯乙酮葡萄糖苷处理的DCs（树突状细胞）促同种异体T细胞增殖的能力明显低于未经对羟基苯乙酮葡萄糖苷处理的DCs促增殖的能力。（三）通过MTT（四甲基偶氮唑蓝）还原法，发现对羟基苯乙酮葡萄糖苷体外能够明显抑制人突状细胞增殖。（四）在体内条件下，通过对羟基苯乙酮葡萄糖苷对EAE（实验性自身免疫病脑脊髓膜炎）的预防作用实验，发现对羟基苯乙酮葡萄糖苷腹腔注射组小鼠的平均临床得分和脊髓单核细胞浸润程度明显低于未注射组。（五）对羟基苯乙酮葡萄糖苷对小鼠心脏移植排斥的抑制作用实验，发现对羟基苯乙酮葡萄糖苷腹腔注射组小鼠的心脏存活天数明显高于未注射组。（六）通过对羟基苯乙酮葡萄糖苷对迟发型超敏反应的抑制试验，发现对羟基苯乙酮葡萄糖苷腹腔注射组小鼠的耳片肿胀度明显低于未注射组。上述体内和体外的实验结果，均显示了对羟基苯乙酮葡萄糖苷可用于制备抗自身免疫病和抗移植排斥疾病药物。 

本发明所述对羟基苯乙酮葡萄糖苷通过下列方法制备： 

兔儿风（Incarvillea delavay）全草，每次用80%乙醇6-7倍量W/V回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩得浸膏，加水5倍量稀释后用2%HCl， 调PH至2-3，过滤，得滤液和滤渣，滤液加20%NaOH调PH至11，用氯仿萃取3次，每次5倍量，得到氯仿部位；减压浓缩氯仿萃取部位，得到粗品羟基苯乙酮葡萄糖苷。将粗品与硅胶H（200～300目）2倍量混合拌样以氯仿-丙酮（20:1～2:1）系统梯度洗脱，收集含对羟基苯乙酮葡萄糖苷（薄层层析检测）的流分，再经C18反相硅胶（40～70μm）柱层析，以甲醇-水（50%-70%）进行洗脱，薄层层析检测，得对羟基苯乙酮葡萄糖苷纯品。 

本发明所述药物由对羟基苯乙酮葡萄糖苷作为活性成分与药用载体组成的制剂。根据不同用途可制成不同规格的口服剂型、注射剂、栓剂或外用剂型等。