[发明专利]一种侧胞芽孢杆菌WY9701制剂的固体发酵生产方法

权利要求书

1.一种侧胞芽孢杆菌WY9701制剂的制备方法包括以下步骤：

   （1） 菌种活化：

    本发明采用侧胞芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）WY9701作为发酵菌种，菌种保藏编号：SCTCC 100657，购于中国工业微生物菌种保藏中心，将-80℃保存的侧胞芽孢杆菌WY9701菌种在种子培养基（胰化蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g，25%浓度MnSO₄添加至0.2%，琼脂粉15g，调pH8.0，加水至1升，高温高压灭菌备用）固体斜面上划线，33℃培养24~48小时；

   （2）制备一级种子：

    将活化的侧胞芽孢杆菌WY9701菌种，用接种环挑取一环接种于200 mL 液体种子培养基中（胰化蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g，25%浓度MnSO₄添加至0.2%，调pH8.0，加水至1升，高温高压灭菌备用），将三角瓶置于摇床中，33℃，250rpm，振荡培养24~48小时后，制得一级种子液；

   （3）配制固体发酵培养基：固体干基：以玉米粉、小麦粉和豆饼粉为基础料（玉米粉40~70%；小麦粉15~30%；豆饼粉5~15%），葡萄糖1.5%，NaCl 0.6%，KH₂PO₄ 0.3%，MnSO₄·H₂O 0.04%；将固体干基加入质量比为1:1~2的无菌水，pH值为自然条件，搅拌均匀；将固体培养基经121℃、20min高温高压灭菌，待冷却后即可作为固体发酵培养基使用；

   （4）固体发酵：将经过灭菌处理的固体发酵培养基按照3~5%的接种量接入一级种子菌，搅拌均匀，保持湿度为40~60%，温度为30~33℃培养24~28个小时，制得二级种子；将二级种子按照3~5%的接种量加入灭菌固体发酵培养基中进行扩大培养，搅拌均匀，保持湿度为40~60%，温度为30~33℃培养24~48个小时，制得三级种子；可以根据具体的培养用量，进一步将三级种子按照3~5%的接种量进一步扩大培养；将侧胞芽孢杆菌WY9701培养物进行菌落计数，活菌体浓度可达1.0~2.5×10⁹ CFU/g 鲜曲，芽孢形成率在90%以上；

    （5）将固体发酵的侧胞芽孢杆菌WY9701培养物进行低温干燥或者50~65℃干燥不超过60min，粉碎和包装，制成产品。

2.根据权利要求1所述的侧胞芽孢杆菌WY9701固体发酵生产，其特征在于所述的固体干基：以玉米粉、小麦粉和豆饼粉为基础料（玉米粉40~70%；小麦粉15~30%；豆饼粉5~15%），葡萄糖1.5%，NaCl 0.6%，KH₂PO₄ 0.3%，MnSO₄·H₂O 0.04%。

3.根据权利要求1所述的侧胞芽孢杆菌WY9701固体发酵，其特征在于：培养温度为30~33℃，湿度为40~60%。

4.根据权利要求1所述的侧胞芽孢杆菌WY9701固体发酵，其特征在于：各级种子菌接种量为3~5%的接种量。

5.根据权利要求1所述的侧胞芽孢杆菌WY9701固体发酵，其特征在于：所用的菌种为芽孢杆菌属侧胞芽孢杆菌WY9701。

6.根据权利要求1所述的侧胞芽孢杆菌WY9701发酵，其特征在于：作为饲料添加剂的应用领域为畜禽饲料添加剂。