[发明专利]一种荧光实时PCR法检测食品中鸭源性成分的方法

权利要求书

1.一种鸭源特异性的实时荧光PCR引物、探针体系。鸭源性上游引物F：5′-GCAACTGCCTTCGTAGGTTATGTC-3′；鸭特异性下游引物R：5′-GGAGGGCTGAAAATAAGTTGGTAA-3′；鸭特异性探针序列P：5′(FAM)-ATGAGGACAAATATCGTTCTGAGGAGCTACCGTA-3′(TRAMA)。 

2.一种用权利要求1所述的鸭源特异性的实时荧光PCR引物、探针体系进行食品中鸭源性成分的检测。主要步骤包括： 

1)样品中DNA的提取； 

2)以提取到的DNA为模板，用权利要求1所述引物探针体系进行实时荧光PCR反应，反应体系的体积为25μL：Taqman PCR master mix12.5μL；上下游引物、荧光标记探针各1μL；模板DNA1μL；其余不足用灭菌双蒸水补齐； 

3)在样品检测的同时，设置空白对照(以水代替DNA模板)、阴性对照(以非目标肉DNA为模板)、阳性对照(以纯鲜鸭肉DNA为模板)； 

4)反应循环参数：50℃，2min；95℃，10min；95℃，15s，60℃，1min，40个循环，于实时荧光PCR仪上进行。阈值设置时保证阈值不小于阴性对照的最高荧光值，使阴性对照Ct值大于35； 

5)质量控制对照结果： 

空白对照：无荧光信号检出； 

阴性对照：无荧光信号检出(Ct值大于35)； 

阳性对照：有荧光信号检出，且出现典型的扩增曲线，Ct值＜28。 

6)结果判定： 

Ct值小于35，且空白、阴性及阳性对照结果正常者判为检出鸭源性成分； 

Ct值大于35，且空白、阴性及阳性对照结果正常者判为未检出鸭源性成分；空白、阴性及阳性对照结果结果异常时重做实验。