[发明专利]百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法有效
| 申请号： | 201310225467.1 | 申请日： | 2013-06-07 |
| 公开（公告）号： | CN103283604A | 公开（公告）日： | 2013-09-11 |
| 发明（设计）人： | 张本厚;陈集双;胡燕花;贾明良 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学大丰海洋产业研究院 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00;A61L2/18 |
| 代理公司： | 南京正联知识产权代理有限公司 32243 | 代理人： | 王素琴 |
| 地址： | 224100 江苏省盐城市大*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 百合 组织培养 脱除 体内 方法 | ||
1.一种百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于,包括以下步骤：
a、预处理：将百合鳞茎用清水清洗去除表面泥沙，剥下鳞片再次清洗，在超净台中将百合鳞片切成小块；
b、内生菌浸出：将步骤a中所得百合鳞片小块放入装有无菌去离子水的容器中，容器密封后放置将内生菌浸出；
c、表面消毒：在超净台中将步骤b中无菌去离子水浸泡过的百合鳞片小块进行表面消毒；
d、接种培养：将步骤c中表面消毒后的百合鳞片小块接种到固体培养基中，培养观察有无内生菌；
e、连续消毒：在步骤d的接种后培养观察，如果培养基中长出百合内生菌，取出百合鳞片进行连续消毒后继续接种观察，重复对长出百合内生菌的百合鳞片进行连续消毒与接种观察，直到培养基中无百合内生菌长出。
2.如权利要求1所述的百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于：所述步骤a的预处理中将百合鳞片去除表皮，并切割成0.5~6.0cm2的小块。
3.如权利要求1所述的百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于：所述步骤b中所述密封容器放置在温度为25~37℃环境中放置0.5~8h，进行内生菌浸出。
4.如权利要求1所述的百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于，所述步骤c中表面消毒的具体步骤为：在超净台中将百合鳞片小块从无菌去离子水中取出，用无菌水清洗1~3遍后，放入75%的乙醇中浸泡0.1~0.5min，再由无菌水清洗2~3次后，放入浓度0.1%的升汞溶液中1~30min后，再由无菌水清洗5~8次。
5.如权利要求4所述的百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于，所述步骤c中表面消毒后，切除百合鳞片小块表皮。
6.如权利要求1-5任一项所述的百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于：所述步骤e中接种使用的固体培养基的配方为：MS+0.5~2.0mg/L 6-BA+0.01~0.5mg/L NAA+0.1~0.5mg/L 多菌灵+25~35g/L蔗糖+5~10g/L琼脂粉PH5.0~6.8。
7.如权利要求6所述的百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于：所述使用固体培养基的培养环境为温度25~27℃，光照周期为10~14h/d。
8.如权利要求1-5任一项所述的百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于，所述步骤e中连续消毒具体为：在超净台中将百合鳞片从固体培养中取出，无菌水清洗2~3遍后，放入75%的乙醇中浸泡0.1~0.3min，无菌水清洗2~3次，再放入0.1%的升汞溶液中1~15min，无菌水清洗4~7次。
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