[发明专利]淡水四大家鱼分子鉴定的方法

权利要求书

1.淡水四大家鱼分子鉴定的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（1）基因组DNA提取：提取DNA备用；

（2）PCR扩增：利用引物对DNA溶液扩增，扩增体系为：10×PCR buffer（含Mg²⁺）2.5μL、dNTPs 0.25 mmol/L、引物各20 pmol/L、Taq DNA聚合酶1 U、DNA模板10~200 ng，补充灭菌双蒸水至20μL；

（3）PCR反应：反应程序94℃预变性5 min, 然后94℃变性30 s、62℃退火30 s、72℃延伸1 min，共进行30个循环，循环结束后72℃再延伸8 min；

（4）电泳检测：PCR结束后，取2~5μL溶液在1%琼脂糖凝胶上电泳，观察照相；

（5）结果判断：结合四大家鱼的引物，出现一条大小约900 bp DNA带的且与引物相对应的即为草鱼；出现一条大小约750 bp DNA带的且与引物相对应的即为青鱼；出现一条大小约1000 bp DNA带的且与引物相对应的即为鲢；出现一条大小约700 bp DNA带的且与引物相对应的即为鳙，其他种类无扩增产物或无明显目的 DNA带。

2.根据权利要求1所述的淡水四大家鱼分子鉴定的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的引物分别为：青鱼引物为MypmitDF：5′TTGCATAAACCAAATATCC3′和MypmitDR：5′TTAGGCCAATATTTTGGGGA 3′；草鱼引物为CtimitDF：5′CACCCCTGGCTCCCAAAGCCA 3′和CtimitDR：5′GATTTTTAGGCTAATATTTGGAA 3′；鲢鱼引物为：HymDR F：5′CATAATGCATTAGTACTAG 3′和HymDR R：5′TGCATGCGGAGTTTCTTAGGAC 3′；鳙鱼引物为：HnomitDF：5′- ACAAATTCCACCCCCGT -3′和HymDR：5′- TGCATGCGGAGTTTCTTAGGAC -3′。