[发明专利]新芒果苷对照品提取纯化分离方法

权利要求书

1.一种新芒果苷对照品提取纯化分离方法，其特征在于，依次包括下述步骤：

1）提取

首先将知母药材粗碎，在室温条件下，每千克知母药材加入一升70%乙醇浸润20～28h小时后渗漉提取，收集药材质量12倍量渗漉提取液，将得到渗漉提取液浓缩至在60℃时，相对密度为1.2的浓缩液，过滤浓缩液，收集滤液加蒸馏水稀释体积数等于开始加入70%乙醇的体积数，即为上柱样品液，最后将样品液按0.5BV上样量通入装有树脂的色谱柱中，依次用2BV的纯化水、1BV的10%乙醇、3BV的20%乙醇、2BV的70%乙醇、2BV的95%乙醇洗脱，收集20%乙醇洗脱部分的洗脱液，减压浓缩至乙醇完全除去，静置12小时，过滤，得到样品液；

2）纯化

首先采用聚酰胺吸附

将步骤1）的得到样品液按0.1BV上样量通入装有聚酰胺的色谱柱中，用4BV的30%乙醇洗脱，收集0.5～3BV洗脱部分的洗脱液，在减压浓缩后，干燥，为新芒果苷粗品；

再新芒果苷粗品加水稀释至新芒果苷粗品质量的两倍后滤膜过滤，得上样药液；然后将该上样药液按0.15BV上样量通入装有Sephadex LH20的色谱柱中，依次用12BV的纯化水、4BV甲醇、5BV纯化水洗脱，收集12BV纯化水洗脱部分的洗脱液，减压浓缩后干燥，重复Sephadex LH20吸附过程3次，得到新芒果苷提纯后粗品；

3）分离

将步骤2）制备的新芒果苷提纯后粗品，加水溶解，制成含新芒果苷20mg/ml的溶液，用半制备高效液相分离，流动相为体积比为14∶86的乙腈和2%醋酸，波长为315nm，收集第一个馏分即得。

2.根据权利要求1所述的新芒果苷对照品提取纯化分离方法，其特征在于，步骤1）所述的渗漉提取时的渗漉速度为每千克药材每分钟收集渗漉液量4ml。

3.根据权利要求1所述的新芒果苷对照品提取纯化分离方法，其特征在于，步骤1）所述的渗漉提取液浓缩时采用旋转薄膜浓缩仪-0.06～-0.1Mpa减压浓缩。

4.根据权利要求1所述的新芒果苷对照品提取纯化分离方法，其特征在于，步骤2）所述的洗脱速度均为20ml/min。

5.根据权利要求1所述的新芒果苷对照品提取纯化分离方法，其特征在于，步骤2）所述的滤膜过滤时采用0.45um滤膜。